百螢問答之鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物實驗過程是怎樣的

時間：2023/12/25閱讀：126

一.百螢鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物概述

鏈霉親和素綴合物廣泛用于和Biotin 綴合物結(jié)合以檢測多種生物靶標，例如蛋白質(zhì)，核酸和其他分子。它們被用作許多生物檢測的理想選擇，例如免疫熒光顯微鏡，流式細胞術(shù)，蛋白質(zhì)印跡和其他生物應(yīng)用，因為鏈霉親和素具有很強的親和力結(jié)合Biotin ，在廣泛的pH和溫度范圍內(nèi)都不會受到影響。AAT Bioquest®提供多種標記有經(jīng)典熒光染料的鏈霉親和素偶聯(lián)物（例如：FITC，TRITC，TexasRed®，Cy3®，Cy5®和Cy7®），以及我們優(yōu)異的水溶性，光穩(wěn)定性iFluor 和mFluor 染料。然而，常規(guī)的Biotin -親和素檢測系統(tǒng)仍然受到現(xiàn)有熒光綴合物有限信號強度的限制。鏈霉親和素Xtra iFluor綴合物是超亮鏈霉親和素綴合物的新家族，其激發(fā)和發(fā)射性能與Alexa Fluor熒光團幾乎相同，信號增強了3到5倍。它是在細胞成像或流式細胞儀中檢測低豐度靶標的一組強大工具。iFluor 488是FITC通道成像中常見的綠色熒光色之一。

二.百螢鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物參數(shù)

Ex(nm) 491

Em(nm) 516

分子量 ~52000

溶劑 Water

存儲條件在-15℃以下保存，避光防潮

三.百螢鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物適用儀器

流式細胞儀

Ex: 488nm

Em: 530/30nm

通道: FITC通道

熒光顯微鏡

Ex: FITC濾波片組

Em: FITC濾波片組

通道: 黑色透明底板

四.百螢鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物實驗方案

溶液配制

1.儲備溶液配制

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
鏈霉親和素-Xtra 儲備溶液（1 mg / mL）：加入100 uL的Cat＃46000和1 mL的Cat＃46001的ddH2O，制成1mg/mL的儲備溶液。注意：此重組溶液在4°C儲存并避光保存后，可穩(wěn)定保存6個月而無明顯變化。為了更長的存儲時間，可以將重構(gòu)的溶液分成單次使用的等分試樣，或者不分裝添加等體積的甘油（濃度為50％），然后將溶液存儲在-20°C（避光）。

2.工作溶液配制

鏈霉親和素-Xtra 工作溶液：對于IF，建議的染色濃度為1-5 ug / ml。對于FACS，建議在染色濃度為0.1-0.5 ug / 100 uL /百萬細胞。注意： PBS + 0.1％BSA可用作染色緩沖液。注意：為了獲得每種應(yīng)用的性能，需要仔細確定該試劑的濃度。注意：建議的工作稀釋度僅供參考，建議用戶在測試中使用適當(dāng)?shù)年栃院完幮詫φ諏Ξa(chǎn)品進行滴定。

樣品示例及操作

1. 按照說明書中的建議用目標抗體封閉和處理樣品。

2. 在樣品中以適當(dāng)?shù)臐舛群统掷m(xù)時間添加Biotin 偶聯(lián)的二抗工作溶液。注意：請驗證您的Biotin 偶聯(lián)抗體與實驗中使用的一抗的相容性和類型。例如，如果一抗是小鼠抗體，則與Biotin 結(jié)合的山羊抗小鼠抗體可用于該測定。

3. 在室溫下用鏈霉親和素-Xtra 工作溶液孵育細胞30分鐘至1小時。注意：孵育的時間需要仔細確定。

4. 取出工作溶液，然后將細胞重懸在緩沖液中。

5. 使用熒光顯微鏡拍攝圖像或使用流式細胞儀記錄強度。

圖示：

圖1.用鏈霉親和素-Xtra iFluor 綴合物和鏈霉親和素Alexa Fluor 綴合物染色的Hela細胞圖像對比。Hela細胞用4％多聚甲醛固定30分鐘，用0.02％Triton X-100透化10分鐘，并用1％BSA封閉1小時。然后將固定的Hela細胞在室溫下用1 µg / mLα微管蛋白小鼠單克隆抗體染色1小時，然后用GxM IgG-Biotin （Cat#16729）染色，然后用Streptavidin-Xtra iFluor 488和Streptavidin-Alexa Fluor 488染色.細胞核用Hoechst 33342（藍色，Cat#17535）染色。

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