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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
本試劑盒不但準確、快速、靈敏,還具有以下特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單。
2. 預期的 PCR 產物長度為 494 bp。
3. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產品名稱 | |
英文名稱 | Streptococcus agalactiaePCR |
貨號 | XG-P2129 |
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
包姜氏瓊脂培養基250g用于百日咳菌分離培養
麥康凱瓊脂 乳糖發酵基礎上鑒別分離腸桿菌 500g incubation media 麥康凱瓊脂 乳糖發酵基礎上鑒別分離腸桿菌 500g
長野解普魯蘭桿菌 模式菌株。產耐高溫耐酸性普魯蘭酶 支/瓶
含Bolton肉湯均質袋用于空腸彎曲菌的增菌培養
BPLS瓊脂 250g 用于藥品等多種標本中沙門氏菌檢驗選擇性分離培養(美國藥品和歐洲藥品檢測方法)PR112一抗稀釋液50ml 進口分裝 小鼠抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒
疏水層析介質(丁基硫瓊脂糖)50ml 進口分裝 小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒
CoomassiebrilliantblueG250 進口分裝 小鼠血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1)ELISA試劑盒
標記山羊抗兔IgG(H+L) 進口分裝 小鼠仙臺病毒抗體(HVJ-Ab)ELISA試劑盒CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人表皮黑色素細胞-中色素HEM-m
兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)
QG-56細胞,人肺扁平上皮癌細胞 中國倉鼠倉鼠卵巢細胞亞株,CHO-K1細胞 CM-M010小鼠肺大動脈平滑肌細胞*培養基100mL
Saos-2(人骨肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
Gibco 12558-011 TM-C100 Complete Medium,(system) 1 set
無乳鏈球菌PCR檢測試劑盒0.水250g用于制備藥品樣品的稀釋液或沖洗液
瓊脂 250(g) incubation media 瓊脂 250(g)
克雷伯氏顯色培養基 克雷伯氏顯色培養基 250克 克雷伯氏菌快速顯色分離培養
氯化三苯四氮唑-沙保羅培養基250用于分離真菌,酵母菌等incubationmedia氯化三苯四氮唑-沙保羅培養基250用于分離真菌,酵母菌等
胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎 250g 用于蠟樣芽孢桿菌的溶血測試驗MaltExtract麥芽浸膏500gincubationmediaMaltExtract麥芽浸膏500g 進口分裝 Epigoitrin 表告依春 1072-93-1 20mg
LBBrothAgar培養基 進口分裝 Baohuoside I 寶藿苷I 113558-15-9 20mg
TryptoneBroth培養基 進口分裝 Anemoside A3 白頭翁皂苷A3 129724-84-1 20mg
4651CM軟骨細胞培養基500mlincubationmedia4651CM軟骨細胞培養基500ml 進口分裝 Aloin A 蘆薈苷 1415-73-2 20mgNRBF2 Others Human 人 NRBF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
RLFs, 大鼠肺成纖維細胞
人胚胎膀胱組織來源細胞;CCC-HB-2
犬腎細胞系/IgR;MDCK/IgR 恒河猴胚腎細胞,FRhK-4細胞 MV-1-Lu細胞,鼬肺上皮細胞
人羊膜細胞;WISH
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/India/NIV33487/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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