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使用及效果:將壓碎的一小重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
本試劑盒不但準確、快速、靈敏,還具有以下特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單。
2. 預期的 PCR 產物長度為 494 bp。
3. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產品名稱 | |
英文名稱 | Sarcocystis spp.PCR |
貨號 | XG-P2070 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后*后加)
1 確定PCR反應液或其他酶促反應液的體積。將PCR反應液或其他酶促反應液轉移至一個新的1.5 ml離心管中,向其中加入等體積溶液BD。混合均勻。
2 將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min。
3 12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:此時DN段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
若溶液體積大于純化柱容積(800 μl),可分兩次離心。
4 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。
此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質,以獲得高質量DN段。
5 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
6 12,000 rpm 離心 3min,以*去除純化柱中的液體。
注:此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續酶促反應。同時也利于DN段的充分溶解。
7 將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的處,懸空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃預熱),靜置2min。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DN段。貯存于-20℃。
注:溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的段的多少、用戶對目的段濃度要求而定。
對溶液Eluent 60℃預熱,會提高提取DNA目的段的產量。
大豆胨酵母浸粉瓊脂(PYE)250g用于真菌的選擇性分離培養
BPL瓊脂 250(g) incubation media BPL瓊脂 250(g)
1% NaC1發酵管 1% NaC1發酵管 20支 BR
玫瑰紅鈉瓊脂250用于霉菌、酵母菌計數incubationmedia玫瑰紅鈉瓊脂250用于霉菌、酵母菌計數
BoltomBrothAdditrive人抗鼠抗體(HAMA)ELISAKit 進口分裝 洛匹那韋代謝產物M-1 Lopinavir Metabolite M-1 : 192725-39-6 質量規格: 美國進口
人上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISAKit 進口分裝 4-羥基-2--2H-1,2-苯并噻嗪-3-羧酸鹽 1,1-二氧化物 Methyl 4-Hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothi-3-carboxylate 1,1-Dioxide : 35511-15-0 質量規格: 美國進口
人相關血漿蛋白A(PAPP-A)ELISAKit 進口分裝 -d3 Betahistine-d3 Dihydrochloride : 244094-72-2 質量規格: 美國進口
人補體7(C7)ELISAKit 進口分裝 7-屈螺 7-Chloromethyl Drospirenone : 932388-90-4 質量規格: 美國進口小鼠背部脊髓神經元(MN-dsc)(1×106)
人顱骨造骨細胞總RNAHCO NA
倉鼠腎細胞;HL-1
小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP 小鼠內臟脂肪細胞*培養基 100mL
HET-1A, 人食管上皮細胞 Human
CD209B Others Mouse 小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 人細胞裂解液 (陽性對照)
肉孢子蟲通用PCR檢測試劑盒AgarmediumF
尿道病原菌快速雙面培養管(顯色培養基用) 個 incubation media 尿道病原菌快速雙面培養管(顯色培養基用) 個
Fraser肉湯增菌液FB1配套試劑 2x5支 試劑A和試劑B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。
克氏雙糖鐵瓊脂KliglerIronAgar用于細菌復合生化試驗(葡萄糖,乳糖)
Melamine萘酸鈷 進口分裝 人癌細胞
無菌去離子水 進口分裝 人癌細胞
DL-beta-苯(>98%,BR) 進口分裝 人食管癌細胞
ECL發光試劑 進口分裝 人胰腺癌細胞IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細胞裂解液 (陽性對照)
人癌細胞;MDA-MB-435S
CM-H098人皮微血管內皮細胞*培養基100mL
BGC-803細胞,人胃癌細胞 人骨肉瘤細胞,HOS細胞 人臍靜脈內皮細胞;HUV-EC
EL4(小鼠淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細胞裂解液 (陽性對照)
產品及特點:
本產品是一管式超快植物種子和葉基因組DNA 提取試劑,得到的產物可以直接用于PCR。整個過程簡單快速,尤其適合于大規模的轉基因植物篩選時樣品的制備。
1. 快速,整個過程只需要15分鐘左右,不需要液氮對植物組織進行冰凍、機械處理、純化或者DNA的沉淀。運輸及保存2. 一管式,在一個試管內完成所有操作,不容易交叉污染。常溫運輸及保存,有效期一年。
3. 裂解液可以直接用于PCR,剩余樣品可以在4℃保存一月以上。
4. 便于高通量和自動化,適合于海關和企業進行大規模的GMO PCR 篩選。
5. 適用于大多數植物葉和種子。
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