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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
產品名稱:禽沙門氏菌PCR檢測試劑盒
英文名稱:Salmonella gullinarumPCR
編號:XG-P2050
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
啶酮酸紙片(30ug/片)于空腸彎曲菌藥敏試驗。
改良麥康凱(CT-SMAC)瓊脂 Modified Sorbitol Maconkey Agar 用于大腸桿菌O157的分離培養(GB2008)標準
Raka-Ray 培養基 Raka-Ray Medium 250 用于啤酒中乳酸菌檢測和分離培養
氯三糖鐵瓊脂250g/瓶含aCl,用于弧菌生化試驗incubationmedia氯三糖鐵瓊脂250g/瓶含aCl,用于弧菌生化試驗
SeleniteCystineBroth小鼠FMS樣酪酸激酶3配體elisa試劑盒 進口分裝 (標準品) Calcium gluconate : 299-28-5 質量規格: 檢查
豚鼠內皮素1elisa試劑盒 進口分裝 TGX221 TGX-221 : 663619-89-4 質量規格: >98%,特異性的p110β抑制劑
小鼠游離脂肪酸elisa試劑盒 進口分裝 多巴(標準品) L-Methyldopa : 41372-08-1 質量規格: 含量測定
小鼠骨鈣素/骨谷酸蛋白elisa試劑盒 進口分裝 麥芽三糖(標準品) MALTOTRIOSE : 1109-28-0 質量規格: 供檢查用VDR Others Mouse 小鼠 VDR / NR1I1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人結直腸腺癌細胞;LoVo
rEPC,大鼠內皮祖細胞-骨髓
rCSC, 大鼠心肌細胞 [CIP 104328;IAM 13570;ICMP 5794;NCPPB 2991]細胞 HBL-100(整合SV40 基因的上皮細胞)
人T淋巴瘤細胞Jurkat亞系;Jurkat77
SERPINA3C Others Mouse 小鼠 SERPINA3C / Serpina3c 人細胞裂解液 (陽性對照)
禽沙門氏菌PCR檢測試劑盒AlkalineAgar
Reinforced clostridial agar(RCM)梭狀芽孢桿菌加強瓊脂 1.05410.0500 MERCK默克 incubation media Reinforced clostridial agar(RCM)梭狀芽孢桿菌加強瓊脂 1.05410.0500 MERCK默克
結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA) 250g 用于阪崎腸桿菌的選擇性分離培養以及腸道菌的計數和鑒別
兔脂肪間質干細胞成骨誘導分化培養基Rabbitadiposederivedmesenchymalstemcells,osteogenicdifferentiationmedium
LPM瓊脂 250g 用于單增李氏菌選擇性分離(加入七葉苷和檸檬酸鐵銨)(FDA標準)阿利克侖-5 進口分裝 小鼠類胰島素生長因子結合蛋白-1(mouse IGFBP-1)
+碳酸鈉 進口分裝 小鼠8異前列腺素(mouse 8-iso-PG)
鈉 進口分裝 小鼠骨保護素(mouse OPG)
溴莫尼定 進口分裝 小鼠P53蛋白(mouse P53)大鼠淋巴纖維細胞(RLF)(5×105)
人無色素睫狀上皮細胞RNAHNPCEpiC miRNA5 μg
非洲綠猴腎細胞;CV-1
615小鼠網織細胞性白血病瘤株;L615 小鼠腎足突細胞*培養基 100mL
人絨毛膜毛細血管內皮細胞 Human
EFNA2 Others Mouse 小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 人細胞裂解液 (陽性對照)
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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