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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
產品名稱:沙門氏菌通用PCR檢測試劑盒
英文名稱:Salmonella spp.PCR
編號:XG-P2062
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床
膽硫乳瓊脂培養基(DHL)(05藥典)250g用于沙門氏菌選擇性分離培養。
肉浸液肉湯 250(g) incubation media 肉浸液肉湯 250(g)
60%/L氯蛋白胨肉湯 L Nac1 Peptone Water 250克 副溶血性弧菌的前增菌培養
YM瓊脂250用于霉菌、酵母菌及耐酸菌的分離培養(Acumedia方法)incubationmediaYM瓊脂250用于霉菌、酵母菌及耐酸菌的分離培養(Acumedia方法)
TrypticaseSoyBrothwithFerrousSulfate人軍團菌抗原elisa試劑盒 進口分裝 2,3-二基對苯二酚(>97.0%(GC)(T)) 2,3-ohydroquinone : 4733-50-0 質量規格: >97.0%(GC)(T)
組織型纖溶酶原激活劑(t-PA) 進口分裝 1-氮雜-15-冠-5-醚(>98.0%(T)) 1-Aza-15-crown 5- : 66943-05-3 質量規格: >98.0%(T)
人黏膜地址素細胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISAKit 進口分裝 2-(羥)-15-冠5-醚(>96.0%(GC)) 2-(Hydroxymethyl)-15-crown 5- : 75507-25-4 質量規格: >96.0%(GC)
人白細胞共同抗原(LCA/CD45)ELISAKit 進口分裝 單-2-O-(對磺酰)-β-環糊精水合物(>97.0%(HPLC)) Mono-2-O-(p-sulfonyl)-β-cyclodextrin Hydrate : 84216-71-7 質量規格: >97.0%(HPLC)SCN3B Others Human 人 SCN3B 人細胞裂解液 (陽性對照)
腦膜細胞培養基MenCM-prf
大鼠肺大動脈內皮細胞*培養基 100mL
BLU-87 人膀胱移行細胞癌 BLU-87 human bladder ansitional cell carcinoma RPMI1640 (內含2mM-glutamine)+10%胎牛血清
BTC Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BTC / Betacellulin 蛋白 (Fc 標簽)
MuM-2C(人眼脈絡黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 氣管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
沙門氏菌通用PCR檢測試劑盒AgarmediumS(R2A)
BPLS Agar Brilliant-green phenol-red-lactose sucrose agar modified 1.10747.0500 MERCK默克 incubation media BPLS Agar Brilliant-green phenol-red-lactose sucrose agar modified 1.10747.0500 MERCK默克
血平板 90mm×20個 用于營養要求較高的細菌的培養及溶血試驗(GB 4789.10-2010,GB/T4789.37-2008 ,GB 4789.30-2...
麥康凱瓊脂MaconkeyAgar用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(OXOID方法)
李斯特氏菌檢驗檢驗培養基氯化鍶六水 進口分裝 人T淋巴瘤細胞
2-氯乙基膦酸(>90%,植物激素級) 進口分裝 人橫紋肌肉瘤細胞
異檸檬酸脫酶 進口分裝 人視網膜母細胞
二羥基丙(>97%,BR) 進口分裝 人肺鱗癌細胞CD53 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD53 (aa 107-181) 人細胞裂解液 (陽性對照)
內膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
豚鼠胚胎細胞;104C1
LTEP-a-2細胞,人肺腺癌細胞 猴腎細胞系,VERO E6細胞 CM-M050小鼠卵巢顆粒細胞*培養基100mL
SHG-44 (人膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
NHEK.f-c pooled 正常人表皮角質形成細胞(NHEK)少年,混合 500,000cells 原代上皮細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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