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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
產品名稱:羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Orf Virus(ORFV)PCR
編號:XG-P1854
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
堿性瓊脂平板250g用于分離霍亂弧菌
China blue-lactose agar 中國藍乳糖瓊脂 1.02348.0500 MERCK默克 incubation media China blue-lactose agar 中國藍乳糖瓊脂 1.02348.0500 MERCK默克
緩沖蛋白胨水(緩沖胨水增菌液)(BPW) 250g 用于沙門氏菌、阪崎腸桿菌的前增菌培養
C57BL/6小鼠脂肪間質干細胞成骨誘導分化培養基C57BL/6mouseadiposemesenchymalstemcellsintoosteoblastsdifferentiationculturemedium
PalcamAgaradditive(A+B)Dihydrotanshinone I 二丹參 I 87205-99-0
(R)-1,2,6,7,8,9-Hexahydro-1,6,6-trimethyl-phenanthro(1,2-b)furan-10,11-dione 隱丹參 35825-57-1
Sodium danshensu 丹參素鈉 67920-52-9
Oridonin 冬凌草甲素 28957-04-2RK2 Others Rat 大鼠 kB / RK2 人細胞裂解液 (陽性對照)
非洲綠猴腎細胞;BS-C-1
人氣管上皮細胞*培養基 100mL
UM細胞,人葡萄膜黑色素細胞 土曲霉 人胃癌細胞;MKN-45
ANGPTL4 Protein Human 重組人 ANGPTL4 蛋白 (Fc 標簽)
L6(大鼠成肌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照)
羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒ChalmersAgar,Modified
D/E中和瓊脂 D/E Neutralizing Agar 用于衛生環境中微生物的分離培養
牛膽鹽 Bile salt from ox 25克 BR,60%
改良NBB瓊脂基礎250g/瓶用于啤酒中厭氧菌的檢測incubationmedia改良NBB瓊脂基礎250g/瓶用于啤酒中厭氧菌的檢測
HB-PET自誘導培養基 250g 用于基因工程菌大腸桿菌自誘導蛋白表達培養支原體肉湯培養基 進口分裝 考馬斯亮藍R250 Brilliant Blue R : 6104-59-2 質量規格: BS
液體鹽胱酸培養基 進口分裝 鋅試劑 Zincon : 62625-22-3 質量規格: AR
增菌肉湯培養基E 進口分裝 俾斯麥棕Y Bismarck Brown Y : 10114-58-6 質量規格: BS
培養基P 進口分裝 6-基熒光素 6-Aminofluorescein : 51649-83-3 質量規格: 0.95GSK3B Others Human 人 GSK3B 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
CL-0168Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經瘤細胞)5×106cells/瓶×2
人視網膜色素上皮細胞裂解物HRPEpiCL
NCI-H1755[H1755]細胞,人肺癌細胞 人胚肺成纖維細胞,HELF細胞 卵巢上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
兔主動脈平滑肌細胞;SMC
TIMP2 Others Human 人 TIMP2 / TIMP-2 人細胞裂解液 (陽性對照)
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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