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產品及特點:
本產品是一管式超快植物種子和葉基因組DNA 提取試劑,得到的產物可以直接用于PCR。整個過程簡單快速,尤其適合于大規模的轉基因植物篩選時樣品的制備。
1. 快速,整個過程只需要15分鐘左右,不需要液氮對植物組織進行冰凍、機械處理、純化或者DNA的沉淀。運輸及保存2. 一管式,在一個試管內完成所有操作,不容易交叉污染。常溫運輸及保存,有效期一年。
3. 裂解液可以直接用于PCR,剩余樣品可以在4℃保存一月以上。
4. 便于高通量和自動化,適合于海關和企業進行大規模的GMO PCR 篩選。
5. 適用于大多數植物葉和種子。
產品名稱:米德爾堡病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Middelburg VirusRTPCR
編號:XG-P1733
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用及效果:將壓碎的一小重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
1 確定PCR反應液或其他酶促反應液的體積。將PCR反應液或其他酶促反應液轉移至一個新的1.5 ml離心管中,向其中加入等體積溶液BD?;旌暇鶆颉?/span>
2 將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min。
3 12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:此時DN段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
若溶液體積大于純化柱容積(800 μl),可分兩次離心。
4 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。
此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質,以獲得高質量DN段。
5 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
6 12,000 rpm 離心 3min,以*去除純化柱中的液體。
注:此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續酶促反應。同時也利于DN段的充分溶解。
7 將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的處,懸空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃預熱),靜置2min。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DN段。貯存于-20℃。
注:溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的段的多少、用戶對目的段濃度要求而定。
對溶液Eluent 60℃預熱,會提高提取DNA目的段的產量。
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后*后加)
氯血瓊脂基礎250g用于副溶血性弧菌的溶血試驗(GB標準)
幽門螺旋桿菌培養基(液體) 250g 用于幽門螺旋桿菌選擇性增菌培養。
HE 瓊脂(HE) Hektoen Enteric Agar 250 用于沙門氏菌的選擇性分離培養(FDA標準)
MEE肉湯250g/瓶用于腸道菌選擇性增菌incubationmediaMEE肉湯250g/瓶用于腸道菌選擇性增菌
SuperBrothZIRCONIUM 鋯粉 7440-67-7
Zirconium acetate 乙酸鋯 7585-20-8
2-Chloro-4-nitrophenol 2--4-硝基酚 619-08-9
Zirconium carbide 碳化鋯/納米碳化鋯 12070-14-3FAM19A2 Others Human 人 FAM19A2 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠小膠質細胞MM
大鼠甲狀腺上皮細胞*培養基 100mL
AML-12小鼠正常肝細胞 Normal liver cells of AML-12 mice DMEM+10%FBS
EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標簽)
SMC-1(人胸膜瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 胃黏膜上皮Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
米德爾堡病毒PCR檢測試劑盒FungalMedium
HE瓊脂(HE) 1000(g) incubation media HE瓊脂(HE) 1000(g)
半固體瓊脂發酵管 半固體瓊脂發酵管 20支 BR
PALCAM添加劑*到HB4用于李氏菌的選擇性分離培養incubationmediaPALCAM添加劑*到HB4用于李氏菌的選擇性分離培養
TTC瓊脂基礎 250g 用于彎曲桿菌的TTC試驗(GB標準)二氧化硅標準溶液(1000μg/ml,介質:0.05mol/L NaOH) 進口分裝 大鼠胎兒表皮角質形成層細胞*培養基
釤標準溶液(1000μg/ml) 進口分裝 大鼠腦膜細胞*培養基
鄰苯二甲酸二乙酯標準溶液(1000μg/ml,溶劑:) 進口分裝 小鼠肺大動脈平滑肌細胞*培養基
樂(標準品) 進口分裝 小鼠肝星形細胞*培養基PDCD1LG2 Others Cynomolgus 食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 人細胞裂解液 (陽性對照)
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0922
CM-H082人臍靜脈內皮細胞*培養基100mL
CRL-2780細胞,人結腸癌細胞 人骨髓瘤細胞,3T3D細胞 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞;NK-92 [NK92]
WB-F344(大鼠肝上皮樣干細胞) 5×106cells/瓶×2
BMPR2 Others Human 人 BMPR-II 人細胞裂解液 (陽性對照)
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