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使用及效果:將壓碎的一小重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱:馬立克氏病病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Marek's Disease Virus(MDV)PCR
編號:XG-P1717
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后*后加)
1 確定PCR反應液或其他酶促反應液的體積。將PCR反應液或其他酶促反應液轉移至一個新的1.5 ml離心管中,向其中加入等體積溶液BD。混合均勻。
2 將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min。
3 12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:此時DN段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
若溶液體積大于純化柱容積(800 μl),可分兩次離心。
4 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。
此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質,以獲得高質量DN段。
5 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
6 12,000 rpm 離心 3min,以*去除純化柱中的液體。
注:此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續酶促反應。同時也利于DN段的充分溶解。
7 將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的處,懸空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃預熱),靜置2min。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DN段。貯存于-20℃。
注:溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的段的多少、用戶對目的段濃度要求而定。
對溶液Eluent 60℃預熱,會提高提取DNA目的段的產量。
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)250g用于霉菌,酵母菌計數(GB/SN標準)
尿素瓊脂基礎 250(g) incubation media 尿素瓊脂基礎 250(g)
V-P半固體瓊脂發酵管 V-P半固體瓊脂發酵管 20支 BR
Half–Fraser培養基250用于李氏菌的增菌培養(MERCK標準)incubationmediaHalf–Fraser培養基250用于李氏菌的增菌培養(MERCK標準)
培養基 250g 用于彎曲桿菌耐受性試驗(GB標準)SILVER TRIFLUOROMETHANESULFONATE *烷磺酸銀(Ⅰ) 2923-28-6
Silver sulfadi 銀 22199-08-2
3-Bromobenzoic acid 3-溴苯 585-76-2
2-Bromo 2-溴 18698-97-0PRKAR1A Others Human 人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人海馬趾神經細胞cDNAHN-h cDNA
T739小鼠肺腺癌瘤株;LA795
HCCC-9810細胞,人肝癌亞力山大細胞 人APP-PS1(C410Y)雙基因轉染細胞株,7WCY1.0細胞 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2
Lec1(倉鼠卵巢細胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-28015 Mesenchymal Stem CellNeurogenic Differe. Medium, 間充質干細胞神經性分化培養基(即用型) 100ml
馬立克氏病病毒PCR檢測試劑盒GC瓊脂250g用于淋球菌的分離培養(OXOID方法)
Salmonella enrichment broth acc.to RAPPAPORT-VASSILIADIS( RVS) 1.07700.0500 MERCK默克 incubation media Salmonella enrichment broth acc.to RAPPAPORT-VASSILIADIS( RVS) 1.07700.0500 MERCK默克
3%氯三糖鐵瓊脂 250g 用于副溶血性弧菌的生化反應。(GB、SN)
MartinAgarMedium,Modified
ColiformChromogenicMedium明膠蛋白胨;蛋白胨E 進口分裝 人非小細胞肺癌細胞
EZ-Buffers A 10 x 電泳緩沖液 進口分裝 人癌細胞
鹽四水 進口分裝 大鼠胰腺外分泌細胞
有機硅消泡劑 進口分裝 人結腸癌轉基因細胞NOV Others Human 人 CCN3 / NOV 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
CL-0354HFSF(人胚胎眼鞏膜成纖維細胞)5×106cells/瓶×2
人骨骼肌衛星細胞總RNAHSkMSC NA
CHRF細胞,人巨核細胞白血病 人肺癌細胞系(未分化),Calu-6細胞 5637, 人膀胱癌細胞
家貓皮膚細胞;FCA-S1
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Brisbane/59/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
產品及特點:
本產品是一管式超快植物種子和葉基因組DNA 提取試劑,得到的產物可以直接用于PCR。整個過程簡單快速,尤其適合于大規模的轉基因植物篩選時樣品的制備。
1. 快速,整個過程只需要15分鐘左右,不需要液氮對植物組織進行冰凍、機械處理、純化或者DNA的沉淀。運輸及保存2. 一管式,在一個試管內完成所有操作,不容易交叉污染。常溫運輸及保存,有效期一年。
3. 裂解液可以直接用于PCR,剩余樣品可以在4℃保存一月以上。
4. 便于高通量和自動化,適合于海關和企業進行大規模的GMO PCR 篩選。
5. 適用于大多數植物葉和種子。
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