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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
本試劑盒不但準確、快速、靈敏,還具有以下特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單。
2. 預期的 PCR 產物長度為 494 bp。
3. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產品名稱 | |
英文名稱 | Influenza Virus AH1N2RTPCR |
貨號 | XG-P1626 |
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
培養基Q250g營養非常豐富,用于各種細菌的基礎培養基。
Blood agar(base)no.2 血瓊脂(基礎)2號 1.10328.0500 MERCK默克 incubation media Blood agar(base)no.2 血瓊脂(基礎)2號 1.10328.0500 MERCK默克
明膠培養基(營養明膠) 100g 供測定細菌液化明膠使用(GB15979-2002和GB/T4789.28-2003 中3.10,GB/T4789.35-2003)。
胰膘肉湯基礎TryptoseBrothBase用于肺炎鏈球菌、布魯氏菌屬細菌的培養
BeefBrothMedium(withSugar)2,4-Dichloro 2,4-二 95-73-8
Barium fluoride 化鋇 7787-32-8
Methanol 67-56-1
Heptan-1-ol 正 111-70-6LAMP1 Others Rat 大鼠 LAMP1 / CD107a 人細胞裂解液 (陽性對照)
人視網膜星形膠質細胞HRA
大鼠小腸平滑肌細胞*培養基 100mL
Dami人巨核細胞白血病細胞 Dami human megakaryocytic leukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
FGF18 Protein Human 重組人 FGF18 / FGF-18 蛋白 (His 標簽)
BT-20(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人肺動脈平滑肌細胞HPASMC
甲型流感病毒12亞型PCR檢測試劑盒Koser氏枸椽酸鹽肉湯2200g用于細菌的枸櫞酸鹽的試驗
6201-prf CMM-prf 心肌細胞培養基 500 ml incubation media 6201-prf CMM-prf 心肌細胞培養基 500 ml
Sabouraud’sGlucoseAgarMedium
DNA酶瓊脂于核糖核酸酶檢測
BM液體培養基 250g 用于醋酸鈣不動桿菌增菌培養人S100鈣結合蛋白A6(S100A6)酶聯免疫吸附測定試劑盒 進口分裝 異歐前胡素 英文名稱: Hu Su in front of the same : 482-45-1 分子式: 270.28 分子量: C16H14O4
人谷酸脫羧酶2(GAD2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 進口分裝 鹽 英文名稱: Licorice two : 79165-06-3 分子式: 分子量:
人乳過氧化物酶(LPO)酶聯免疫吸附測定試劑盒 進口分裝 鹽酸藥根堿 英文名稱: Hydrochloric acid : 6681-15-8 分子式: 373.8301 分子量: C20H20ClNO4
人素瘤衍生亮酸拉鏈額外核因子(MLZE)酶聯免疫吸附測定試劑盒 進口分裝 英文名稱: Asarone : 2883-98-9 分子式: 208.25364 分子量: C12H16O3AIM2 Others Human 人 AIM2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
腦動脈血管內皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
小鼠垂體瘤細胞(分泌促生長激素分泌激素);AtT-20
293T/17[HEK 293T/17]細胞,人胚腎細胞 人膽管細胞型肝癌細胞,HCCC-9810細胞 CL-0160Molt-4(人急性淋巴母細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2
倉鼠卵巢細胞;Lec1
FGFR4 Others Mouse 小鼠 FGFR4 / CD334 人細胞裂解液 (陽性對照)
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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