當前位置:上海西格生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50T小隱孢子蟲PCR檢測試劑盒
產品及特點:
本產品是一管式超快植物種子和葉基因組DNA 提取試劑,得到的產物可以直接用于PCR。整個過程簡單快速,尤其適合于大規模的轉基因植物篩選時樣品的制備。
1. 快速,整個過程只需要15分鐘左右,不需要液氮對植物組織進行冰凍、機械處理、純化或者DNA的沉淀。運輸及保存2. 一管式,在一個試管內完成所有操作,不容易交叉污染。常溫運輸及保存,有效期一年。
3. 裂解液可以直接用于PCR,剩余樣品可以在4℃保存一月以上。
4. 便于高通量和自動化,適合于海關和企業進行大規模的GMO PCR 篩選。
5. 適用于大多數植物葉和種子。
本試劑盒不但準確、快速、靈敏,還具有以下特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單。
2. 預期的 PCR 產物長度為 494 bp。
3. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產品名稱 | |
英文名稱 | Cryptosporidium parvumPCR |
貨號 | XG-P1300 |
使用及效果:將壓碎的一小重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當的其他形狀)的植物葉直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
1 確定PCR反應液或其他酶促反應液的體積。將PCR反應液或其他酶促反應液轉移至一個新的1.5 ml離心管中,向其中加入等體積溶液BD。混合均勻。
2 將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min。
3 12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:此時DN段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
若溶液體積大于純化柱容積(800 μl),可分兩次離心。
4 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
注:溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。
此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質,以獲得高質量DN段。
5 加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
6 12,000 rpm 離心 3min,以*去除純化柱中的液體。
注:此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續酶促反應。同時也利于DN段的充分溶解。
7 將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的處,懸空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃預熱),靜置2min。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DN段。貯存于-20℃。
注:溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的段的多少、用戶對目的段濃度要求而定。
對溶液Eluent 60℃預熱,會提高提取DNA目的段的產量。
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后*后加)
胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎250g用于蠟樣芽孢桿菌選擇性的增菌培養
LES Endo m-Endo Agar,LES 用于濾膜細菌計數
氯化三苯四氮唑-沙保羅培養基 TTC-Sabourand’s Medium 250 用于分離真菌,酵母菌等
馬鈴薯葡萄糖水(PD水)250g/瓶用于椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗中GVC培養基的制備,每培養基中添加incubationmedia馬鈴薯葡萄糖水(PD水)250g/瓶用于椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗中GVC培養基的制備,每培養基中添加1101
ModifiedMacConkeyBroth本StyreneGCS2ml
SM0312GeneRuler 1kb DNA Ladder196
C7902-500GCalcium Chloride 錄化鈣10035-04-8500g
Cholesterol100g
瑞氏色素5gFLRT1 Others Human 人 FLRT1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人小腦星形膠質細胞HA-c
L6 大鼠成肌細胞
CM-H051人胎盤滋養層細胞*培養基100mL
SK-N-SH, 人神經母細胞瘤細胞
人成骨肉瘤細胞;Saos-2 人脈絡膜微血管細胞*培養基 100mL
小隱孢子蟲PCR檢測試劑盒SabouraudsAgar
DNA酶瓊脂 100(g) incubation media DNA酶瓊脂 100(g)
脫羧酶對照發酵管 脫羧酶對照發酵管 20支 BR
胰蛋白胨水培養基250用于靛基質試驗incubationmedia胰蛋白胨水培養基250用于靛基質試驗
BoltonSelectiveEnrichmentbrothadditive球孢鏈霉菌油脂酵母,含油30%支/瓶 進口分裝 乙酸鎳四水(>98%,BC) Nickel (II) acetate, tetrahydrate : 6018-89-9 質量規格: >98%,BC
生孢梭菌糖化菌支/瓶 進口分裝 1,4-3,6-雙脫水(>98%,BR) 1,4-3,6-Dianhydro-D-mannitol : 641-74-7 質量規格: >98%,BR
桃色歐文氏菌支/瓶 進口分裝 2'-脫氧肌酐-5'-磷酸鈉(>98%,BR) 2'-Deoxyinosine-5'-monophosphate sodium salt : 14999-52-1 質量規格: >98%,BR
溫特曲霉抑制陽性細菌,產生石蕊殺菌素和鏈絲蘭素。支/瓶 進口分裝 4,5-二熒光素(>98%,BR) 4,5-Dichlorofluorescein : 2320-96-9 質量規格: >98%,BRITGA5 & ITGB1 Others Human 人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照)
人表皮角質細胞總RNAHEK NA
KYSE30 人食管癌細胞
CL-0320BC3H1(小鼠腦瘤細胞)5×106cells/瓶×2
RN-c, 大鼠皮質神經元
人胚胎心臟成纖維樣細胞;HEH2 人子成纖維細胞*培養基 100mL
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