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上海西格生物科技有限公司
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馬梭菌PCR檢測(cè)試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)50T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2020-10-29 09:33:37瀏覽次數(shù):174次

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產(chǎn)品及特點(diǎn):
本產(chǎn)品是一管式超快植物種子和葉基因組DNA 提取試劑,得到的產(chǎn)物可以直接用于PCR。整個(gè)過程簡(jiǎn)單快速,尤其適合于大規(guī)模的轉(zhuǎn)基因植物篩選時(shí)樣品的制備。
1. 快速,整個(gè)過程只需要15分鐘左右,不需要液氮對(duì)植物組織進(jìn)行冰凍、機(jī)械處理、純化或者DNA的沉淀。運(yùn)輸及保存2. 一管式,在一個(gè)試管內(nèi)完成所有操作,不容易交叉污染。常溫運(yùn)輸及保存,有效期一年。
3. 裂解液可以直接用于PCR,剩余樣品可以在4℃保存一月以上。
4. 便于高通量和自動(dòng)化,適合于海關(guān)和企業(yè)進(jìn)行大規(guī)模的GMO PCR 篩選。
5. 適用于大多數(shù)植物葉和種子。
本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速、靈敏,還具有以下特點(diǎn):
1.  即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單。
2.  預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 494 bp。
3.  本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

馬梭菌PCR檢測(cè)試劑盒

 英文名稱

 Clostridium equiPCR

 貨號(hào)

 XG-P1255

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使用及效果:將壓碎的一小重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
1  確定PCR反應(yīng)液或其他酶促反應(yīng)液的體積。將PCR反應(yīng)液或其他酶促反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的1.5 ml離心管中,向其中加入等體積溶液BD。混合均勻。
2  將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min。
3  12,000 rpm離心1min,棄濾液。
   注:此時(shí)DN段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
       若溶液體積大于純化柱容積(800 μl),可分兩次離心。
4  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
   注:溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。
       此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質(zhì),以獲得高質(zhì)量DN段。
5  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
6  12,000 rpm 離心 3min,以*去除純化柱中的液體。
   注:此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續(xù)酶促反應(yīng)。同時(shí)也利于DN段的充分溶解。
7  將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的處,懸空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃預(yù)熱),靜置2min。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DN段。貯存于-20℃。
   注:溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的段的多少、用戶對(duì)目的段濃度要求而定。
       對(duì)溶液Eluent 60℃預(yù)熱,會(huì)提高提取DNA目的段的產(chǎn)量。
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 段作為陽性對(duì)照。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測(cè)樣品需要做三次重復(fù),下表只列出一次。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后*后加)
增菌肉湯培養(yǎng)基E250g用于腸桿菌科細(xì)菌的增菌培養(yǎng)

念珠菌顯色培養(yǎng)基B 25000 mL/瓶 incubation media 念珠菌顯色培養(yǎng)基B 25000 mL/瓶

改良的McBride瓊脂MMA 250g 用于單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB/T4789.30-2003,SN0184-93)。

MH湯(MHB)Mueller-HintonBroth用于抗生素敏感試驗(yàn)

PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250g 用于雙岐桿菌增菌培養(yǎng),使用時(shí)需加入氯化血紅素和1(GB標(biāo)準(zhǔn))GDX 105(聚二本多孔小球)GDX 105,Polydivinylbenzene porous beads60-80目25g

PP09696孔 細(xì)胞培養(yǎng)板148

B0149-25GBicine150-25-425g

3-(環(huán)己安基)-1-丙磺酸25g

Trichloroacetic Acid500gULBP2 Others Human 人 ULBP2 / N2DL-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

中國倉鼠肺細(xì)胞;R 1610 [R1610]

KG-1 人髓性紅白血病細(xì)胞

HeLa 229人細(xì)胞 HeLa 229 human cervical cancer cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

HGF Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白

小鼠周神經(jīng)成纖維細(xì)胞(MPNF)(5×105) HL-60, 人早幼粒白血病細(xì)胞 Human
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痤瘡丙酸桿菌 模式菌株。 支/瓶

含酶TSA培養(yǎng)基平板(7cm)用于環(huán)境、器皿、設(shè)備和表面的無菌檢測(cè)

AntibioticAgarNo.7甘油(for spectroscopy,≥99.5%)  進(jìn)口分裝  U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞

石油醚(for GC,用于環(huán)境分析)  進(jìn)口分裝  人結(jié)腸癌細(xì)胞

鄰氯甲醛(Standard for GC)  進(jìn)口分裝  人色素瘤細(xì)胞

間硝基甲苯(Standard for GC)  進(jìn)口分裝  人胚肺成纖維樣細(xì)胞(男)CAMK2B Others Human 人 CAMK2B / CaMKII-beta 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

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牛陀螺狀細(xì)胞;BT

CHL/IU[CHL-11]細(xì)胞,中國倉鼠肺細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞,PANC-1細(xì)胞 CM-R085大鼠表皮角化細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠癌細(xì)胞;SHZ-88

BMPR2 Others Human 人 BMPR-II 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 

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