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產品名稱:弗氏檸檬酸桿菌PCR檢測試劑盒
英文名稱:Citrobacter freundiiPCR
編號:XG-P1244
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
指示選擇性培養基基礎250g用于炭疽桿菌的分離鑒別
DIASALM acc.to VAN NETTEN and VAN der ZEE DIASALM培養基 1.09803.0500 MERCK默克 incubation media DIASALM acc.to VAN NETTEN and VAN der ZEE DIASALM培養基 1.09803.0500 MERCK默克
蔗糖胰蛋白胨肉湯 250g 用于致病性嗜水氣單胞菌的培養,供斑點酶聯免疫試驗用(GB/T 18652-2002)
Balb/c小鼠骨髓間質干細胞成軟骨誘導分化*培養基Balb/cmousebonemarrowmesenchymalstemcellsintochondrocytesinduceddifferentiationofcompletemedium
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎添加劑 1ml/支*5 每支加入225mlHB4186中GDX101(聚二本多孔小球)GDX 101,Polydivinylbenzene porous beads60-80目25g
PL025-2φ25mm一次性針式濾器177
C0392-500G-1CHES 2-環已胺-1-乙磺酸
Bromothymol Blue, wo7ium Salt25g
四甲基錄化銨100gCD59 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 人細胞裂解液 (陽性對照)
主動脈內皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
中國倉鼠肺細胞;V79
H1299細胞,人肺腺癌細胞 SV40轉化的非洲綠猴腎細胞,COS-7細胞 CM-M058小鼠膀胱上皮細胞*培養基100mL
SH-SY5Y(人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
NHEK-c 正常人表皮角質形成細胞(NHEK),混合 500,000cells 原代心肌細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
弗氏檸檬酸桿菌PCR檢測試劑盒SS瓊脂培養基2308g用于沙門氏菌和某些志賀氏菌的選擇性分離培養。(《中華人民共和國藥典》20
Tryptone Soya Agar 胰蛋白胨大豆瓊脂現貨 Oxoid 500G incubation media Tryptone Soya Agar 胰蛋白胨大豆瓊脂現貨 Oxoid 500G
青枯假單胞菌 白酒和酒精生產的糖化用菌。 支/瓶
胰胨大豆胨固綠瓊脂250g用于濾膜細菌總數的測定和分離培養(NEOGEN方法)
BismuthSulfiteAgarMedium鹽酸* 進口分裝 層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒
* 進口分裝 大鼠再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒
*(標準品) 進口分裝 大鼠性激素結合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒
羅*(標準品) 進口分裝 大鼠上腺素(EPI)ELISA試劑盒EPD2 Others Human 人 PDase 2 / EPD2 (aa 29-460) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人肝永生化細胞;THLE-3
CL-0388NCI-H157(人非小細胞肺腺癌細胞)5×106cells/瓶×2
C2C12, 小鼠肌原細胞 人前列腺癌細胞,DU145細胞 SK-MES-1(人肺癌細胞)
人肺巨細胞癌低轉移細胞株;PG-LH7
CPM Others Human 人 CPM / Carboxypeptidase M 人細胞裂解液 (陽性對照)
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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