操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

大鼠腸巨噬細(xì)胞提取物【Rat Intestinal: Normal Intestinal Derivatives】
大鼠腸巨噬細(xì)胞提取物是從大鼠原代腸巨噬細(xì)胞提取的，大鼠原代腸巨噬細(xì)胞從正常大鼠腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠腸巨噬組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3-METHYL-1,3-BUTANEDIOLN-亞硝基二胺-D6和N-亞硝基二正胺-D14（NDMA-D6和NDanti- IL-7 antibody基質(zhì)Gla蛋白(MGP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

3-Methyl-2-buten-1-ol4種胺類混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- IL9 antibody破骨細(xì)胞刺激因子1(OSF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

3-METHYL-L-HISTIDINE N-HYDRATECustom Semi-Volatile Mix（9組分） 標(biāo)準(zhǔn)品anti- IL9 antibody肝素結(jié)合性表皮生長因子(HBEGF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

3-Methylbenzyl alcohol8種除蟲菊酯類混標(biāo)（HJ 753-2015）anti- ILF3 antibody饑餓素(GHRL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

3-Methylpiperidine;3-Pipecoline; β-Pipecoline;3種內(nèi)標(biāo)混標(biāo)（菲-d10，芘-d10，屈-d12）（HJ 753-201anti- ILK antibody饑餓素(GHRL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

3-METHYLTETRAHYDROFURAN4種酰胺類半揮發(fā)性物混標(biāo)（HJ 801-2016）anti- ILK antibody饑餓素(GHRL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

3-METHYLADENINE9種鄰苯二酸酯混標(biāo)(GB20388-2016，ISO 14389 紡織anti- ILKAP antibodyδ-促睡眠肽(δSIP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

3-MethoxybenzylamineEPA 506 7種鄰苯二酸酯混標(biāo)（DEHP、BBP、DEP、DMP、anti- ILVBL antibody醛固酮合酶(ALDOS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

大鼠腸巨噬細(xì)胞提取物Aspergillus awamori Nakazawa, anamorph胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白樣1抗體Human MIP-1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit干擾素α7(IFNα7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Cladosporium sp.免疫球蛋白D重鏈保守區(qū)抗體Human MIP-3a/CCL20(Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit干擾素α6(IFNα6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..IV型己糖激酶抗體Human MMP-1(Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit干擾素α5(IFNα5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Resinicium furfurellum (Bresadola) Nakasone ..免疫球蛋白lambda樣肽1抗體Human MMP-12(Macrophage metalloelastase) ELISA Kit谷氧還蛋白5(GLRX5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Providencia sneebia Juneja and Lazzaro 2009NF-kappa-B抑制子beta抗體Human MMP13(Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit谷氧還蛋白2(GLRX2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Fibricium subceraceum (Hallenberg) Bernicch ..NF-kappa-B抑制子epsilon抗體Human MMP-3(Matrix Metalloproteinase 3) ELISA KitTescalcin蛋白(TSC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

human (B cell); mouse (myeloma)大鼠血清型IgA抗體Human MMP-7(Matrix Metalloproteinase 7) ELISA KittRNA酸轉(zhuǎn)移酶1(TRPT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Schizosaccharomyces pombe LindnerING4抗體Human MMP-8(Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit跨膜蛋白5(TMEM5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)