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大鼠神經元細胞提取物

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所  在  地上海市

更新時間:2020-10-25 14:36:54瀏覽次數:184次

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操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

大鼠神經元細胞提取物【Rat Brain : Normal Neuron CellsDerivatives】
大鼠神經元細胞提取物是從大鼠原代神經元細胞提取的,大鼠原代神經元細胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠神經元組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。

產品名稱

 大鼠神經元細胞提取物

 規格

 詳見說明書

 貨號

 XG-X6907

 

注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。

培養步驟:

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

N-ALPHA-CBZ-ARG-ARG 7-AMIDO-4-METHYLCOUMARIN HYDROCHLORIDE烯唑醇 標準品anti- KIAA1217 antibody親環素A(CYPA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

1,1-Dichlorodimethyl ether烯唑醇 標準品anti- KIAA1429 antibodyEndoglin蛋白(ENG)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

DICHLORODIPHENYLMETHANE噻草定 標準品anti- KIAA1468 antibody細胞絨毛蛋白(CVL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

ALPHA-DIPHOSPHOPYRIDINE NUCLEOTIDE苯噻酰草胺 標準品anti- KIAA1530 antibody通用轉錄因子ⅡE肽1(GTF2E1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

alpha-Terpineol瘟散(敵瘟) 標準品anti- KIAA1598 antibody殺傷細胞凝集素樣受體亞家族C成員2(KLRC2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

BETA-HCH菊酯 標準品anti- KIAA1602 antibody煙型膽受體β2(CHRNβ2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

DAMASCONE特亞砜 標準品anti- KIAA1984 antibody白介素1受體關聯激酶1(IRAK1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

BETA-DPN LITHIUM SALT氟草酯 標準品anti- KIDINS220 antibody白介素1受體關聯激酶2(IRAK2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

大鼠神經元細胞提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化淋巴細胞特異性蛋白激酶抗體Human TNFRSF10A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A) ELISA KitCystin 1蛋白(CYS1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn低密度脂蛋白受體相關蛋白5抗體Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) ELISA KitCylicin 2蛋白(CYLC2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白5抗體Human FGG(Fibrinogen gamma chain) ELISA KitCylicin 1蛋白(CYLC1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體Human VIP(VIP peptides) ELISA Kit皮質素1(CTXN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Memnoniella subsimplex (Cooke) Deighton, an ..乳酸脫酶D抗體Human β-EP(Beta-Endorphin) ELISA KitCTD酸酶1(CTDP1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

freeze-dried線粒體離子肽酶1抗體Human LRP2(Low-density lipoprotein receptor-related protein 2) ELISA Kit二-N-酰殼二糖酶(CTBS)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..溶酶體蛋白跨膜β4抗體Human CTGF(Connective tissue growth factor) ELISA Kit癌/丸抗原2(CTAG2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human富含重復神經元5抗體Human BMPR1A(Bone morphogenetic protein receptor type-1A) ELISA Kit半蛋白酶抑制劑2(CST2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

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