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操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
人小腦顆粒細胞提取物【Human Brain : Normal Cerebellar Granule Cell Derivatives】
人小腦顆粒細胞提取物是從人小腦顆粒細胞提取的,人小腦顆粒細胞從正常人小腦組織制備。正常人小腦組織采集自各地方醫院,采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人小腦顆粒組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 人小腦顆粒細胞提取物 |
規格 | 詳見說明書 |
貨號 | XG-X6715 |
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
培養步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
BroMocresol green;BroMocresol green sodiuM salt;3,3′,5,5′-TetrabroMo-M-cresol sulfonaphthalein鈦Ti溶液標準物質anti- FCN1 antibody兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒
BroMocresol purple;5,5″-DibroMo-o-cresolsulfonphthalein;BroMocresol red鈦Ti溶液標準物質anti- FCN3 antibody兔白介素17(IL-17)ELISA試劑盒
BroMocyclopentane碲Te溶液標準物質anti- FCRLB antibody兔酰膽(ACh)ELISA試劑盒
BroMophenol blue硒Se溶液標準物質anti- FcRn-Specific antibody兔去腎上腺素(NA)ELISA試劑盒
BroMopyruvic acid硫S溶液標準物質anti- FDFT1 antibody兔子生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒
BroMothyMol blue鉍Bi溶液標準物質anti- FDPS antibody兔子α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒
Butyl carbaMate;n-Butyl carbaMate;CarbaMic acid butyl ester銻Sb溶液標準物質anti- FDX1 antibody兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒
ButyraMide;But*;ButyrylaMide;Butyric aMide銻Sb溶液標準物質anti- FDXACB1 antibody兔子結合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒
人小腦顆粒細胞提取物Aspergillus flavus var.columnaris Raper ..生長抑制DNA損傷基因GADD45β抗體anti- UBE2U antibody連接蛋白4(JPH4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Aspergillus flavus var.columnaris Raper ..G蛋白偶聯受體39抗體anti- UBE2V1 antibody核糖核酸酶A9(RNASE9)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Mus musculus (B cell); Mus musculus (myeloma ..細胞生長抑制蛋白22抗體(基化控制J蛋白)anti- UBE2Z antibodyAnoctamin 9蛋白(ANO9)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
strawberry vein banding caulimovirusGATA結合蛋白2抗體anti- UBE3A antibodyN-去酰化酶/磺基轉移酶4(NDST4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Homo sapiens, human糖蛋白C抗體anti- UBE3C antibodyClarin 3蛋白(CLRN3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Phomopsis oblonga (Desmazieres) Hoehnel, an ..γ氨基酸運載蛋白1抗體anti- UBE4A antibody轉位因子蛋白2(TSPO2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Malassezia dermatis Sugita et al.生長休止特定蛋白7抗體anti- UBE4B antibody半椎蛋白2(HMCN2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..G蛋白偶聯受體LOC51210蛋白抗體anti- UBF1 antibodyAkirin 2蛋白(AKIRIN2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
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