一、細胞基本屬性

生長特性 半貼半懸

細胞形態 神經母細胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養方案A（默認）

生長培養基:

MEM/F12＋10% FBS＋1% P/S

培養條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻)

背景描述 SK-N-BE(2)神經母細胞瘤細胞株是于1972年11月從一位多次化療及放療的擴散性神經母細胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立的；SK-N-BE(2)細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。有報道稱，SK-N-BE(2)細胞的飽和濃度超過1×10^6細胞/cm^2。SK-N-BE(2)細胞形態多樣，有的有長突觸、有的呈上皮細胞樣；SK-N-BE(2)細胞會聚集，形成團塊并浮起。

年齡（性別） 男性；2歲

組織來源 腦；神經母細胞瘤，骨髓轉移灶

細胞類型 腫瘤細胞

腫瘤類型 神經母細胞瘤細胞

生物安全等級 BSL-1

倍增時間 ~36-48 hours

致瘤性 Yes, an inoculum of 1×10^7 cells produced tumors in cortisonized hamster cheek pouches with 18% frequency.

保藏機構 ATCC; CRL-2271 DSMZ; ACC-632 ECACC; 95011815

二、細胞培養操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

a、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、棄上清，沉淀細胞用12ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

d、待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

d、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

三、培養注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。     收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

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