二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境。在整個培養過程中二氧化碳培養箱對氣路和溫濕度的控制非常重要！
1.氣路的控制
氣路由高濃度的CO2鋼瓶、氣泵、穩壓閥、針型閥，電磁閥、流量計及儲氣瓶等組成。當輸入一定壓力的高濃度CO2氣體，通過調節閥、針閥及電磁閥的流量、時間控制，保證一定量的CO2氣體進入工作室，達到自動控制工作室內的CO2濃度值。該值同時通過顯示電路顯示，便于觀察了解。為方便用戶在使用中進行濃度的監視和采樣，在二氧化碳培養箱的后背面裝有采樣、監視口。
因采用了快慢速雙重充氣法，使二氧化碳培養箱在開、關門后，工作室內的CO2濃度能快速恢復且無過沖現象。在二氧化碳培養箱工作過程中，由儲氣瓶對工作室內進行補氣，以保持穩定的CO2濃度值。
2.濕度的控制
因培養物需工作室內保持一定的濕度時，二氧化碳培養箱配有水盤。用戶可在培養時將水盤放入工作室內，水盤加上適量的蒸餾水讓其在工作室內自然蒸發，一般相對濕度可達95%。
3.溫度的控制
二氧化碳培養箱溫度控制器由Pt100鉑電阻作為傳感器與數字控制電路、LED數字顯示電路等組成，當傳感器輸出與溫度成正比的電阻信號轉換成電壓信號經電路放大后，一路送至顯示電路顯示實測溫度。另一路送至比較器與設定值比較。
當二者產生偏差時，觸發可控硅功率管輸出功率使加熱管產生熱量。當偏差減小直至為零時，其加熱管發出的熱量亦隨之減小，直至停止加熱。控制線路中有超溫及水位報警功能。
當顯示溫度超過設定值2.0℃時，溫度控制器發出聲光報警信號，同時切斷輸出，停止加熱，防止溫度繼續上升；當水箱內水位過高或過低時，水位控制器發出聲光報警信號，同時切斷加熱輸出。僅水套式CO2箱具有水位報警功能！
CO2培養箱主要控制模擬活體內環境相關的3個基本變量：穩定的CO2水平、溫度、相對濕度。要有穩定的培養環境，就要考慮這三方面的影響因素，選購時，就應該對這些“重中之重”有一定的了解才能選到適合自己的儀器。但是，其它的一些方面的“小”因素也不能忽略，因為這些都會影響儀器的使用價值和壽命。選購時，就應該從各方面的因素加以考慮。
