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南京億迅生物科技有限公司
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谷丙轉氨酶（ALT/GPT）檢測試劑盒使用說明！
2021-11-15 閱讀(6399)
谷丙轉氨酶（ALT/GPT）檢測試劑盒使用說明！
產品名稱：谷丙轉氨酶（ALT/GPT）檢測試劑盒 微板法
檢測原理：谷丙轉氨酶(ALT）在37℃及PH7.4條件下，作用于丙氨酸及a-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應30分鐘后（固定時間）加入2,4-二硝基苯肼（DNPH）鹽酸溶液，既中止反應，同時DNPH與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于505nm比讀吸光度并計算酶活力。
測定范圍：本試劑盒可以測定各類動物血清(漿)、組織及培養細胞、細胞培養液等樣本中谷丙轉氨酶活力（ALT）。
自備儀器和用品：
酶標儀（510nm或505nm）、微量移液器、漩渦混勻器
試劑組成：
96T | 規格 | 組分 | 保存 |
試劑一 | 5mlX1瓶 | 谷丙轉氨酶基質液 | 4℃冰箱保存6個月 |
試劑二 | 5mlX1瓶 | 2,4-二肖基苯肼液 | 4℃冰箱保存6個月 |
試劑三 | 5mlX1瓶 | 4mol/L氫氧化鈉液 | 室溫密封保存6個月 |
試劑四 | 1支 | 2umol/ml丙酮酸鈉標準液 | 4℃冰箱保存6個月 |
試劑五 | 1支 | 0.1mol/L磷酸鹽緩沖液 | 4℃冰箱保存6個月 |
0.4mol/L氫氧化鈉液的配制：臨用時按4mol/L氫氧化鈉液：雙蒸水=1:9的比例稀釋，需多少配多少，室溫密封保存。 | |||
操作過程（僅供參考）
1.樣本前處理：
A.血清（漿）及其他液體待測樣本：直接取樣測定。
B.動物組織樣本：準確稱取組織重量，按重量（g）:體積（ml）=1：9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿，2500轉/分，離心10分鐘，取上清液待測。
C.培養細胞樣本前處理：將收集好的細胞用等滲緩沖液（推薦0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）清洗1—2次；1000轉/分，離心10分鐘，棄上清，留細胞沉淀，加入勻漿介質（推薦加入0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水），冰浴條件下超聲破碎或手動勻漿，制備好的勻漿液不離心，待測。
2．操作表：
測定孔 | 對照孔 | |
基質液（ul）37℃已預溫 | 2O | 20 |
待測樣本（ul） | 5 |
測定孔每吸取一個樣本，將吸嘴伸入孔板底部基質液中，反復吸打混勻后
37℃反應30分鐘
2,4-二肖基苯肼液(ul) | 20 | 20 |
待測樣本（ul） | 5 |
對照孔每吸取一個樣本，將吸嘴伸入孔板底部液體中，反復吸打混勻后
37℃反應20分鐘
0.4mol/L氫氧化鈉液(ul) | 200 | 200 |
輕輕水平搖動96孔板混勻，室溫放置15分鐘，510nm波長，酶標儀測各孔OD值，以（絕對OD值=測定孔0D值減去對照孔OD值），查標準曲線，求得相應的ALT/GPT活力單位。
注意事項：
1.比色法中常用的有賴氏（Reitman-Frankel）法及金氏法（King）法。賴氏法標準曲線所定單位數，是用實驗方法和卡門氏反光光度法（速率法）作對比測定求得的。以卡門氏單位報告結果比較準確。
卡門氏單位定義：1ml液體，反應液總容量3ml，波長340nm，1cm光徑，25℃，1min內所生成的丙酮酸，使NADH氧化成NAD+而引起吸光度每下降0.001為一個單位（1卡門氏單位=0.482U/L,25℃）
2.一般血清標本內源性酮酸很少，血清對照孔吸光度值接近試劑空白孔（以雙蒸水代替血清，其他和對照孔同樣操作）。所以成批標本測定時，一般不需要每一標本都作本身血清對照孔，以試劑空白孔代替即可，但對嚴重脂血、黃疸或溶血血清，每份標本應做對照孔。
3.酶活力超過150單位時，用生理鹽水稀釋血清后重測。
4.一般的血清對照孔（或稱標本空白孔）的吸光度作為日常質控的指標之一；如相差大，可考慮a-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。
5.血清中ALT在室溫（25℃）可保存2天，在0--4℃可保存一周，在-25℃可保存1個月。
6.本產品僅供科研實驗用，不做其它用途！
