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南京億迅生物科技有限公司
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TTC染色液2％使用步驟介紹
2024-1-30 閱讀(699)
TTC染色液2％使用步驟介紹
【產(chǎn)品名稱】 TTC染色液2％
【產(chǎn)品規(guī)格】 ：100ml
【儲(chǔ)存條件】 ：-20℃冰凍
【有效期】 ：6個(gè)月
【產(chǎn)品介紹】 ：
2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC)，分子量為334.80，分子式為C19H15ClN4，CAS號(hào)為298-96-4。TTC是脂溶性光敏感復(fù)合物，最初用于檢測(cè)種子生存能力，后來(lái)用于染色檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞，TTC是呼吸鏈中吡啶核苷結(jié)合酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，TTC與正常組織中的呼吸酶反應(yīng)而呈紅色，而缺血組織內(nèi)呼吸酶活性下降，不能反應(yīng)，故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白色，該染色是一種用于評(píng)價(jià)組織內(nèi)脫氫酶活性的大體染色方法。
TTC染色液(2%)對(duì)心肌梗死及腦組織壞死區(qū)的觀測(cè)較電鏡早3～6h，較光鏡早24h，多用于尸檢中的新鮮心臟組織和腦組織以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型早期梗死組織的染色。其特點(diǎn)：①TTC染色直接取材于新鮮組織即可染色，無(wú)需固定、包埋等步驟；②TTC染色時(shí)間短，一般20~30min；③TTC染色液可重復(fù)使用，10ml可染20張片子。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、生理鹽水
2、低溫冰箱
3、4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林
操作步驟(僅供參考)：
(一)腦組織染色
1、取待檢新鮮腦組織樣本(一 般可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦)取出后-20℃速凍20~ 30min,便于切片。
2、將待檢腦組織切片,一般動(dòng)物樣本層厚2~ 3mm ,人的樣本層厚3 ~ 5mm ,可連續(xù)切4~5張。第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間(參考:張均田主編，現(xiàn)代藥理試驗(yàn)方法)。
3、切片入TTC Stain(2%)避光浸染30 ~ 35min。
4、切片入4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林中固定4~ 24h。
5、吸干組織表面清水，應(yīng)用IPP等圖像分析系統(tǒng)測(cè)量腦梗死面積并計(jì)算大腦梗死體積。
（二）種子染色
1、取不同活力的種子用刀片做橫切和沿種胚中央準(zhǔn)確縱切,取每粒種子的一半備用。
2、將上述種子置于TTC染色液(2%)中, 37°C避光孵育20min。
3、倒出染色液，自來(lái)水沖洗2~3次，立即觀察種胚著色情況。
染色結(jié)果：
正常心肌或腦組織 | 紅色 |
心肌或腦梗壞死區(qū) | 蒼白色 |
缺血腦組織 | 介于紅色與蒼白色之間 |
注意事項(xiàng)：
1、 TTC Stain(2%)對(duì)人體有輕微刺激性，請(qǐng)注意小心防護(hù)。
2、取腦時(shí)應(yīng)仔細(xì)保持大腦的完整性。
3、如果染色效果不佳，應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。
4、樣本越新鮮越好，為了防止正常心肌及腦組織的酶活性減弱或消失，應(yīng)盡快染色。
5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴-次性手套操作。
