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X-α-gal用作酵母雙雜交系統中藍白篩選的篩選標記
2022-6-15 閱讀(3496)
X-α-gal用作酵母雙雜交系統中藍白篩選的篩選標記
X-α-gal是酵母半乳糖苷酶（MEL1）的顯色底物，MEL1是GAL4酵母雙雜交系統的一個報告基因，該基因受GAL4調控。MEL1編碼的分泌型的α-半乳糖苷酶可水解無色的X-α-gal，形成藍色產物。MEL1基因激活后，X-α-gal檢測陽性克隆表達的α-半乳糖苷酶，陽性克隆直接在含有X-α-gal的固體培養基上呈藍色。因此無需裂解細胞，費時費力的檢測β-半乳糖苷酶報告基因，只需通過藍白顏色篩選，即可快速和簡便地識別陽性克隆。X-α-Gal的用途：1. 用于篩選含X-α-半乳糖苷酶基因的陽性酵母或細菌菌株。在固體培養基上直接檢測酵母雙雜交相互作用。2. 用于區分腸桿菌科內的不同菌種，以及區分雙歧桿菌和乳酸菌3. 在組織化學中用于酶活性的檢測。X-Gal與X-α-gal不同：X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶（LacZ）的反應底物，而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶（MEL1）的反應底物。X-α-gal用作酵母雙雜交系統中藍白篩選的篩選標記。
攜帶MEL1基因的酵母菌株：Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A
操作說明
一、涂布于預制平板：
1）溶解24 mg X-α-gal于6 mL DMF，終濃度為4 mg/ mL。
2）涂布200 μL(15 cm) 或者100 μL（10 cm）X-α-gal 儲存液于預制平板上；
3）置于37℃培養箱至液體被吸收（由于DMF揮發性低，最長可放4小時）；
4）將轉化細菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培養直至藍色菌落出現。
二、直接加入瓊脂中：
1）溶解60 mg X-α-gal于3 mL DMF，終濃度為20 mg/ mL。
2）將已滅菌瓊脂培養基冷卻至50-55℃；
3）向上述培養基中加入20 mg/ mL X-α-Gal，比例為每升培養基中加入1 mL X-α-Gal溶液。
