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丹磺酰氯如何正確操作
2022-6-9 閱讀(2175)
丹磺酰氯如何正確操作
丹磺酰氯是一種與脂肪胺和芳香胺中的伯氨基反應生成穩定的藍色或藍綠色熒光磺酰胺加合物的試劑。可用于測定肽鏈的氨基末端，它能專一地與鏈N-端α-氨基反應生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很強的熒光，可直接用電泳法或層析法鑒定出N-端是何種氨基酸。用于氨基酸和肽的N末端衍生以及通過反相HPLC和其他分析方法檢測多胺等。丹磺酰氯也廣泛用于修飾氨基酸; 特別是蛋白質測序和氨基酸分析。 它也可以用來標記羥基和羧酸官能團。
產品參數
別名： 丹酰氯，二甲氨基萘磺酰氯，Dansyl Chloride ，DNSCl，5-(Dimethylamino)-1-naphthalenesulfonyl chloride，
性狀： 橙黃色粉末
CAS號： 605-65-2
分子式： C12H12CINO2S
分子量： 269.74
純度： ＞98%
溶解性： 溶于丙酮
用途及描述：科研試劑，廣泛應用于分子生物學，藥理學等科研方面，嚴禁用于人體。用于熒光N端衍生氨基酸和肽的熒光試劑，并通過反相HPLC檢測。丹酰氯（DNSC）是一種伯胺反應劑，廣泛用作熒光試劑，用于氨基酸和肽的N末端衍生以及通過反相HPLC和其他分析方法檢測多胺等。
實驗步驟
1. 標準氨基酸的丹磺酰化
分別稱取2 . 3μmol 層析純的氨基酸, 溶于0 . 5 ml 0 . 2 mol/ L碳酸-氫鈉溶液中。取0 . 1 ml 于有塞玻璃試管中, 加入0.1 ml DNS-Cl 丙酮溶液, 檢查pH, 必要時用三乙胺調pH9 . 0～ 9 . 5 ,于室溫(25 ℃ 左右) 下放置2～ 4 h。再用無離子水稀釋10 倍,貯存于暗處。經層析, 得DNS-氨基酸的標準圖譜。
2. 蛋白質N-末端氨基酸的DNS 化
取0 . 5 mg 蛋白質樣品, 置于有塞玻璃管中。用少量水溶解后, 加入0 . 5 ml 0 . 2 mol/ L 碳酸-氫鈉溶液。再加入0 .5 mlDNS-Cl丙酮溶液, 用三乙胺調至pH9 . 0～9 . 5 , 塞好塞子, 于40 ℃ 烘箱中反應2 h , 或室溫(25 ℃左右)放置2～4 h , 生成DNS-蛋白質。
3. DNS-蛋白質的水解
DNS 化反應結束后, 真空蒸去丙酮, 加入0 . 5 ml 6 mol/ L 鹽酸溶解DNS-蛋白質。全部移入水解管, 抽真空封管, 于111 ℃烘箱中水解18～24 h。開管后蒸去鹽酸, 加少量水, 再蒸干。重復2～3 次以除盡鹽酸。
4. DNS-氨基酸的抽提
將上述水解產物, 加0 . 5 ml 水, 用1 mol/ L 鹽酸調至pH2～3。加入0 . 5 ml 乙酸乙酯抽提, 分層可在細長滴管中進行。重復抽提2～3 次, 將上層抽提液合并于小試管中, 抽去乙酸乙酯,置于干燥器中備用。
5. DNS-氨基酸的層析與檢測
生成的DNS-氨基酸和標準DNS-氨基酸分別進行聚酰胺薄膜層析。
