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南京億迅生物科技有限公司
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細(xì)胞鐵離子檢測(cè)試劑盒僅供科學(xué)研究使用
2022-5-11 閱讀(792)
細(xì)胞鐵離子檢測(cè)試劑盒僅供科學(xué)研究使用
產(chǎn)品名稱：細(xì)胞鐵離子檢測(cè)試劑盒
規(guī)格：100次/300次
保存：4℃保存
有效期：6個(gè)月
原理：鐵與蛋白結(jié)合成復(fù)合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來，再被還原劑還原成二價(jià)鐵，并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在540-580nm處可比色測(cè)定。
適用范圍：該試劑盒可用于培養(yǎng)細(xì)胞中鐵離子定量檢測(cè)。
操作步驟：
1. 樣品準(zhǔn)備（以 24 孔板為例）：
將含鐵元素 DMEM 培養(yǎng)過的細(xì)胞用冷的 PBS 2ml 洗兩遍，將 PBS 吸棄（若不馬上檢測(cè)可將 其凍存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解 2h。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將 3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM、150uM、
75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。
3. 將緩沖液與 4.5%koh溶液按 1:1 混勻，稱為混液 A。
4. 參考下表使用 1.5ml 離心管，設(shè)置空白對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元
素含量過高，用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
5. 混勻，60℃ 孵育 1h。
6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。
7. 加入 30ul 鐵離子檢測(cè)劑，混勻，室溫孵育，30min。
8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 測(cè)定吸光度。如果不能測(cè)定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范圍內(nèi)檢測(cè)。
9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算鐵離子濃度。
化學(xué)式Fe(OH)3，為棕色或紅褐色粉末或深棕色絮狀沉淀或膠體，用來制顏料、藥物，用作凈水劑（膠體時(shí)），也可用來做砷的解毒-藥等。
棕色或紅褐色粉末或深棕色絮狀沉淀，在一定條件下分散系為膠體。密度3.4～3.9g/cm3。具有兩性但其堿性強(qiáng)于酸性，新制得的氫氧化鐵易溶于無機(jī)酸和有機(jī)酸，亦可溶于熱濃堿。低于500攝氏度時(shí)*脫水成氧化鐵。加熱分解。氫氧化鐵在烘干時(shí)易分解，但溫度不高時(shí)不*，也就是逐漸失水。但在低于500攝氏度時(shí)能達(dá)到*脫水成氧化鐵。
