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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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- 網(wǎng)址：
- www.yajimall.com
| 參考價(jià) | ￥ 3280 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號(hào)
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間：2019-05-31 10:56:08瀏覽次數(shù)：227
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組織來源：乳腺組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人心肌成纖維原代細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
M199、FBS、上皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-H017）作為體外培養(yǎng)人乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)基。
人心肌成纖維原代細(xì)胞因其培養(yǎng)難度高且傳代次數(shù)有限，細(xì)胞消化的步驟需要格外細(xì)心與謹(jǐn)慎。生物根據(jù)其豐富的原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出一套細(xì)胞消化的方法，有效降低了消化步驟對(duì)細(xì)胞的操作。現(xiàn)分享給大家：
1. 當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80-90%融合時(shí)需要傳代培養(yǎng)。
2. 提前準(zhǔn)備好多聚賴氨酸（PLL，貨號(hào)KL0403）或纖維粘連蛋白（BPF，貨號(hào)KL8248）包被好的培養(yǎng)瓶。
3. 將*培養(yǎng)基，胰酶/EDTA消化液（T/E，貨號(hào)KL0103），胰胰中和液（TNS，貨號(hào)KL0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號(hào)KL0303）加熱至室溫。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。
4. 用DPBS沖洗細(xì)胞。
5. 以T-75培養(yǎng)瓶為例，向培養(yǎng)瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶保證細(xì)胞被胰酶/EDTA消化液*覆蓋。將培養(yǎng)瓶置于37度培養(yǎng)箱1-2分鐘直到細(xì)胞變圓。在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
6. 在消化期間，準(zhǔn)備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS，貨號(hào)KL0500）。
7. 將胰酶/EDTA消化液從培養(yǎng)瓶中吸出至50ml離心管中（一小部分細(xì)胞已消化下來），將培養(yǎng)瓶繼續(xù)置于37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘（此時(shí)培養(yǎng)瓶中沒有液體）。
8. 在孵化結(jié)束時(shí)，輕輕拍打培養(yǎng)瓶側(cè)面使細(xì)胞脫離表面。在顯微鏡下檢查以確保所有細(xì)胞已脫離。
9. 向培養(yǎng)瓶中加入5ml胰酶中和液，將消化后的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至50ml離心管中。再加入5ml胰酶中和液沖洗培養(yǎng)瓶，以保證所有細(xì)胞被收集。
10. 在顯微鏡下觀察剩余細(xì)胞數(shù)量以確定是否收集成功，細(xì)胞數(shù)量應(yīng)小于5%。
11. 以1000轉(zhuǎn)/分離心收取的細(xì)胞懸液5分鐘，然后在培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞。
12. 細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后將細(xì)胞以推薦的細(xì)胞密度接種在包被好的培養(yǎng)瓶中。
