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常用ELISA試劑盒試驗原理辦法簡介

閱讀:600發布時間:2019-11-19

ELISA即酶聯免疫吸附試驗,其基本原理是將必定濃度的抗原或許抗體經過物理吸附的辦法固定于聚苯乙烯微孔板外表,參加待檢標本,ELISA試劑盒經過酶標物顯色的深淺直接反映被檢抗原或許抗體的存在與否或許量的多少。具有快速,定性或許定量乃至定位的特點。

1.雙抗體夾心法
 雙抗體夾心法,其基本原理是將必定量的包被抗體以物理吸附的辦法固定于聚苯乙烯微孔板外表,參加無關蛋白載體關閉未結合位點,然后參加待檢標本,經過參加檢測抗體,酶符號第二抗體后用TMB底物顯色,微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈正相關。
該辦法的適用條件是:含有多個抗原表位的大分子物質。由于這種檢測辦法需求兩種抗體,所以就涉及抗體配對的問題。一般來說,ELISA試劑盒常用的抗體配對辦法有一下幾種:包被抗體為單抗,檢測抗體為多抗;包被抗體為單抗,檢測抗體為單抗,但這兩種單抗針對的抗原表位不同;包被抗體為多抗,檢測抗體為多抗,這兩種多抗一般是來源于不同的宿主。 

2.雙抗原夾心法
雙抗原夾心法,與雙抗體夾心法相似,基本原理是將已知濃度的抗原固定于聚苯乙烯微孔板外表,對未結合位點用無關蛋白載體進行關閉后,參加待檢樣本,然后參加*符號的抗原和HRP符號的鏈霉親和素,經TMB顯色和停止反響,酶標儀讀數之后即可計算待測物濃度。雙抗原夾心法與直接法都能夠對抗體進行檢測,可是前者檢測的是針對該抗原的所有品種的抗體。

3.競賽法
競賽法一般分為直接競賽法和直接競賽法,這里我們以直接競賽法為例進行原理解說。直接競賽法,其基本原理是:將適宜濃度的包被抗體包被于微孔板中,ELISA試劑盒參加無關蛋白載體關閉未結合位點,參加規范品(樣本)和*符號的抗原物質進行競賽結合,經適宜的溫度和必定時間的孵育,洗刷后,參加HRP符號的鏈霉親和素進行反響,TMB顯色,微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負相關。

 


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