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ELISA試劑盒試驗(yàn)競(jìng)賽法的操作過(guò)程

閱讀：273發(fā)布時(shí)間：2019-6-14

當(dāng)ELISA試劑盒抗原材猜中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)賽與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽(yáng)性反響呈色淺于陰性反響。
ELISA試劑盒競(jìng)賽法可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)賽與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。

操作ELISA試劑盒過(guò)程如下：
1.Elisa試劑盒試驗(yàn)中將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗刷。

2.待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反響。如受檢標(biāo)本中無(wú)抗原，則酶標(biāo)抗原能順暢地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的時(shí)機(jī)與固相抗體結(jié)合，競(jìng)賽性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的時(shí)機(jī)，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原，保溫后，酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)充沛的量 

3.加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原多，故色彩深。參考管色彩深度與待測(cè)管色彩深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管色彩越淡，表示標(biāo)本中抗原含量越多。一般狀況，是通過(guò)方波伏安法，檢測(cè)培育系統(tǒng)的峰電流，通過(guò)峰電流與抗原抗體的線性關(guān)系來(lái)確定系統(tǒng)的檢測(cè)目標(biāo)的濃度。 

另一種模式為將標(biāo)本與抗原一同參加到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)賽結(jié)合，洗刷后再參加酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反響?？笻Be的檢測(cè)一般選用此法。 


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