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上海博湖生物科技有限公司
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冷凍細胞活化操作步驟
2024-11-25 閱讀(221)
細胞冷凍yell freexirig是保存微生物或動植物細胞株的常用方法。冷凍細胞到底該如何活化，一個不小心，細胞就受損了。冷凍細胞活化的正確操作步驟:
1. 冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。
2. 細胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質)。
3.步驟：
①操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。
②自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。
③將新鮮培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。
④取出冷凍管，立即放入37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化，以70%ethanol 擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內。
⑤取出0.9 ml 解凍之細胞懸浮液，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(稀釋比例為1:10～1:15)，混合均勻， 放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取0.1 ml 解凍細胞懸浮液作存活測試。
⑥解凍后是否立即去除冷凍保護劑(例如DMSO 或glycerol)，依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10 ml 培養(yǎng)基之離心管內，離心1,000 rpm, 5 分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
⑦若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。
