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瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染主要差異點
2023-12-18 閱讀(466)
瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，這兩者都是將目的基因轉(zhuǎn)染至特定哺乳動物細胞內(nèi)，進而表達得到目的蛋白。但兩種方式在原理，操作流程等方面均有所區(qū)別。
一、實驗原理：
瞬時轉(zhuǎn)染原理：外源基因并沒有轉(zhuǎn)染到細胞的染色體上而是存在于游離的載體上,這樣可以在短時間內(nèi)獲得基因的表達產(chǎn)物，但是隨著細胞的不斷分裂增殖外源基因最終會丟失，無法繼續(xù)進行重組蛋白的生產(chǎn)。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染原理：外源基因轉(zhuǎn)染至細胞染色體上，目的基因不會隨著細胞傳代而消失，能夠長期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(穩(wěn)定細胞系構(gòu)建)能夠?qū)崿F(xiàn)長期、穩(wěn)定的生產(chǎn)重組蛋白。
二、操作步驟
1、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所用的質(zhì)粒是不同的，瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性，而用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便于后續(xù)的克隆株篩選。另外，兩者所用的培養(yǎng)基及實驗試劑也有所區(qū)別。
2、瞬時轉(zhuǎn)染的操作比構(gòu)建穩(wěn)定細胞系的操作簡單，構(gòu)建好質(zhì)粒后,經(jīng)過細胞復(fù)蘇、轉(zhuǎn)染、細胞培養(yǎng)、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白;而構(gòu)建穩(wěn)定細胞系需要先將構(gòu)建好的質(zhì)粒線性化，再得入培養(yǎng)好的哺乳動物細胞內(nèi)，通過一定的轉(zhuǎn)染方式實現(xiàn)質(zhì)粒與細胞的融合，接著經(jīng)過細胞池篩選、單克隆篩選、細胞傳代培養(yǎng)等步驟才能得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系。對穩(wěn)定細胞系進行培養(yǎng)能夠長期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。
三、特點：
瞬時轉(zhuǎn)染：能夠快速生產(chǎn)得到微量至中量的重組蛋白；實驗成本低；一個宿主可以帶有多個拷貝，表達效率高。
穩(wěn)定細胞系構(gòu)建：能夠長期穩(wěn)定生產(chǎn)目的蛋白；得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株之后后續(xù)生產(chǎn)蛋白的成本降低；
能夠?qū)蜻M行基因插入、基因敲除等編輯操作。
