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克必隆零背景T載體

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更新時(shí)間：2018-06-14 13:04:08瀏覽次數(shù)：322次

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  分子生物學(xué)

重組蛋白

工具酶

基因結(jié)構(gòu)和功能研究產(chǎn)品

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克隆及表達(dá)產(chǎn)品

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

克必隆零背景T載體本載體是經(jīng)過*改造的第二代T載體，用戶只需在一個(gè)PCR引物上加上幾個(gè)特殊的堿基，即可零背景克隆和定向克隆，只有當(dāng)PCR片段定向插入到本載體時(shí)，菌落才能生長，其他所有情況（如載體自連、目標(biāo)PCR片段的反向插入、非目標(biāo)PCR片段的正向和反向插入）下菌落均不能生長。本產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1. 零背景，陽性克隆率接近100%。

詳細(xì)介紹

克必隆零背景T載體

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊
克必隆零背景T載體	20次	詢價(jià)

本載體是經(jīng)過*改造的第二代T載體，用戶只需在一個(gè)PCR引物上加上幾個(gè)特殊的堿基，即可零背景克隆和定向克隆，只有當(dāng)PCR片段定向插入到本載體時(shí)，菌落才能生長，其他所有情況（如載體自連、目標(biāo)PCR片段的反向插入、非目標(biāo)PCR片段的正向和反向插入）下菌落均不能生長。本產(chǎn)品特點(diǎn)如下：

1. 零背景，陽性克隆率接近100%。

2. 連接效率高，30分鐘可完成連接反應(yīng)。

3. 簡單，無需使用IPTG/X-Gal進(jìn)行藍(lán)白篩選。

4. 連接產(chǎn)物可直接用于細(xì)菌轉(zhuǎn)化。

5. 用途廣，可用于PCR產(chǎn)物克隆、TA克隆、克隆后的DNA測序、定向克隆。

6. 提供引物一對，可直接用于菌落PCR檢測。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
相關(guān)產(chǎn)品列表：