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克必隆B載體（即用型平末端克隆載體）

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克必隆B載體（即用型平末端克隆載體）本產(chǎn)品是在LMAI Bio克必隆G載體的基礎(chǔ)上開發(fā)的專門用于高效快速克隆平末端DNA段的載體，它是由SmaI酶切克必隆G載體后經(jīng)過純化得到的即用型線性載體。跟克必隆G載體一樣，本產(chǎn)品帶有自基因，SmaI位點(diǎn)位于該基因之中，只有當(dāng)外源平末端DNA插入片段插入SmaI位點(diǎn)，連接后的DNA轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能生長(zhǎng)，所以后得到的轉(zhuǎn)化子幾乎都是含有平末端DNA插入片段

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克必隆B載體（即用型平末端克隆載體）

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克必隆B載體（即用型平末端克隆載體）	2ug	詢價(jià)

本產(chǎn)品是在LMAI Bio克必隆G載體的基礎(chǔ)上開發(fā)的專門用于高效快速克隆平末端DNA段的載體，它是由SmaI酶切克必隆G載體后經(jīng)過純化得到的即用型線性載體。跟克必隆G載體一樣，本產(chǎn)品帶有自基因，SmaI位點(diǎn)位于該基因之中，只有當(dāng)外源平末端DNA插入片段插入SmaI位點(diǎn)，連接后的DNA轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能生長(zhǎng)，所以后得到的轉(zhuǎn)化子幾乎都是含有平末端DNA插入片段的重組子。

1、即用性，可以直接用于連接反應(yīng)，免去繁瑣的酶切，電泳檢測(cè)，純化，去磷酸化，再純化等步驟。

2、具有克必隆-G載體的所有優(yōu)點(diǎn)，包括零背景，適用于所有E.coli菌株，多拷貝的colEI型復(fù)制起始位點(diǎn)。

3、高效率，由于殺基因的使用有效地減除了載體自身環(huán)化對(duì)平末端DNA克隆的影響，自身環(huán)化得到的轉(zhuǎn)化子在有選擇液存在時(shí)只占總轉(zhuǎn)化子的1%-5%。

4、應(yīng)用廣泛，可用于克隆酶切產(chǎn)生的平末端DNA，Pfu酶擴(kuò)增的PCR片段，cDNA段，3'-和5'-RACE片段，Taq酶擴(kuò)增的PCR片段（部分為平末端）。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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