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細胞傳代、復(fù)蘇、凍存操作步驟
2020-7-20 閱讀(7021)
今天文章分享細胞培養(yǎng)方法：
一、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
1.棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
2.加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
3.1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
4.將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
5.用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
6.懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
二、細胞復(fù)蘇：
1.將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
2.在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
三、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
1.棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
2.1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
3.將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
4.將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
