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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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關(guān)于人源細(xì)胞系如何培養(yǎng)及其他
2019-4-9 閱讀(744)
關(guān)于人源細(xì)胞系如何培養(yǎng)及其他：
1 貼壁細(xì)胞生長緩慢；適當(dāng)提高血清濃度（不能超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長特性生長密度，考慮消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
2 如果人源細(xì)胞系為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決
3 生長不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
人源細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)傳代流程
（1）吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2-3ml 0.25%進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通常控制在1-2min）
（2）注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
（3）取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
（4）鏡下觀察消化情況，在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細(xì)胞生長特性邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
