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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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ELISA測(cè)定溫育過(guò)程注意事項(xiàng)
2024-7-15 閱讀(60)
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育。
實(shí)際測(cè)定操作注意事項(xiàng)：
1、不同的溫育環(huán)境對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響，操作中應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)控制溫育時(shí)間及溫度，并注意封閉避免邊緣效應(yīng)。
2、為確保各板溫度都能迅速達(dá)到平衡，不可將反應(yīng)板疊加放置，設(shè)定的溫度及時(shí)間嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，一般加入待測(cè)標(biāo)本后使其與固相抗原(抗體)置于37℃環(huán)境下溫育。因?yàn)楹芏嗪銣叵涞臉?gòu)造，溫度及檢測(cè)的溫度并非酶標(biāo)板溫育溫度，所以使用恒溫箱溫育時(shí)建議將溫度計(jì)置于酶標(biāo)板旁，保證酶標(biāo)板旁溫度為37℃。
3、干育和水溫的影響差異較為明顯，建議使用水溫，注意將固相板放入水中，防止受熱不均勻。
4、試劑盒一般設(shè)定的反響溫度為 37℃，在這個(gè)溫度下放置 30 分鐘，蒸騰的水分會(huì)許多，對(duì)于全部反響體系來(lái)講，各種反響物的濃度會(huì)不斷添加，這么必會(huì)致使反響畢竟的值添加，溫育時(shí)貼封片或加蓋，避免標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁。
5、試劑盒斷定的一定溫度下的反響時(shí)間并不是反響的完畢，添加反響的溫度，會(huì)加速反響，一樣添加時(shí)間會(huì)延伸反響，這么得到的反響程度會(huì)比試劑盒斷定的反響程度多，也會(huì)引起陰性高值或假陽(yáng)性。
6、實(shí)驗(yàn)操作的嚴(yán)謹(jǐn)性與實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范密不可分，未使用的試劑應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃，使用時(shí)應(yīng)回溫到室溫(20-25℃)。切忌不同批次的試劑混合使用，要經(jīng)常檢查酶標(biāo)儀和微量移液器的精度和準(zhǔn)備度…… ELISA看起來(lái)很簡(jiǎn)單，但是在實(shí)際操作過(guò)程中，絕不能掉以輕心，除了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作，高品質(zhì)的試劑盒與專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)也是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的保證！
