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上海邦景實業有限公司
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冷凍細胞解凍過程
2023-11-6 閱讀(98)
收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養， 或立即冷凍保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。冷凍細胞解凍過程:
1、依據細胞株數據單 定之基礎培養基種類、血清種類和其它定之成份和比例，制備培養基。絕大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養基或不同之血清種類，若因實驗需要，必須有所不同時， 務必以緩慢比例漸次改變培養基組成，確定細胞適應后，方進行所需之實驗。
2、 FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對細胞而言差異極大，請務必依據細胞株資料單定之血清種類培養之。
3、 將培養基置于37 °C 水槽中回溫， 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無菌操作臺內。 取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺。
4、 依據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取10 ml 培養基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液， 緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養箱培養。
5、對絕大多數細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍 細胞中去除，待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞，需立即去除DMSO 者，則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養基，將細胞均勻混合后，轉移至培養瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培養箱培養。
