1.生化培養箱開機，恒溫
2.取500mL水樣（上清液）到于1000mL燒杯中，建議各加入0.5mL四種無機鹽溶液，水樣復雜的也可加入接種水，然后調節水樣酸度至6.7～7.5之間（如果水樣酸度在這范圍內就不需要調），在BOD儀上攪拌2小時，
3.按第5頁取水樣表，然后倒到培養瓶內，加一個攪拌子不用蓋上蓋子先，將BOD儀器放入生化培養箱內，插上電源，打開攪拌裝置并將培養瓶放在位置上攪拌（不用蓋蓋子先）2個小時，保持溫度恒定在20度。
4. 取干燥的密封杯，杯中放入5～6粒NaOH或KOH顆粒，擰緊培養瓶蓋，然后再攪拌10分鐘后，松開培養瓶蓋再擰緊擰緊培養瓶蓋及水柱蓋（調節壓力），并再次調節零點。
5.開始計時5天
6.看水銀柱上讀數，然后按以下計算：
BOD5（mg/L）＝ 樣品BOD5讀數×標尺系數
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