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原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養的第一代到第十代以內的細胞統稱為原代細胞。

人外周血T淋巴細胞

商品屬性：

細胞簡介：

人外周血T淋巴分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中出外周血這一新概念。外周血單個核細胞（PBMC）即外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。目前，主要的分離方法是密度梯度離心法，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離出不同的細胞。T淋巴細胞（T-lymphocyte）來源于骨髓的多能干細胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到內，在激素的誘導下分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。成熟的T細胞經血流分布至外周免疫器官的依賴區定居，并可經淋巴管、外周血和組織液等進行再循環，發揮細胞免疫及免疫調節等功能。T細胞的再循環有利于廣泛接觸進入體內的抗原物質，加強免疫應答，較長期保持免疫記憶。T細胞的細胞膜上有許多不同的標志，主要是表面抗原和表面受體。這些表面標志都是結合在細胞膜上的巨蛋白分子。多能干細胞轉變為淋巴樣前體細胞（Lymphoid precursor）遷移至，在的誘導下，經歷一系列有序的分化過程，逐漸在發育成熟為識別各種抗原的T細胞庫。T淋巴細胞進入后首先經歷兩個階段：①早期T淋巴細胞發育階段，即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細胞（double negative cell，DN）分化為CD4和CD8雙陽性T細胞（double positive cell，DP）；②DP細胞分別經歷陽性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識別能力和對自身抗原的耐受性，發育為其表面標志為CD4或CD8的單陽性T細胞（single positive cell，SP），遷往周圍淋巴器官定居。T細胞是相當復雜的不均一體、又不斷在體內更新、在同一時間可以存在不同發育階段或功能的亞群，但分類原則和命名比較混亂，尚未統一。按免疫應答中的功能不同，可將T細胞分成若干亞群，一致的有：1、輔助性T細胞（Helper T cells,Th），具有協助體液免疫和細胞免疫的功能；2、抑制性T細胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制細胞免疫及體液免疫的功能；3、效應T細胞（Effector T cells,Te），具有釋放淋巴因子的功能；4、細胞毒性T細胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有殺傷靶細胞的功能；5、遲發反應T細胞（Delayed type hypersensitivity T cells,Td），有參與Ⅳ型反應的作用；放大T細胞（Ta），可作用于Th和Ts，有擴大免疫效果的作用；6、原始的或天然T細胞（Virgin or Natural T cells），他們和抗原接觸后分化成效應T細胞和記憶T細胞；7、記憶T細胞（Memory T cell,Tm），有記憶特異性抗原刺激的作用。T細胞在體內存活的時間可數月至數年。其記憶細胞存活的時間則更長。其中，Th細胞又被稱為CD4+細胞，因為其在表面表達CD4（cluster of differentiation 4）。通過與MHCⅡ（主要組織相容性復合體，major histocompatibility complex）遞呈的多肽抗原反應被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細胞（antigen presenting cells,APCs）表面表達。一旦激活，可以分泌細胞因子，調節或者協助免疫反應。Tc細胞又名為CD8+細胞，其表面表達CD8。這類細胞可以通過MHCI與抗原直接結合。淋巴細胞主要包括T淋巴細胞（CD3+），B淋巴細胞（CD19+），NK細胞（CD16+CD56+）。

方法簡介：

實驗室分離的人外周血T淋巴經CD3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

實驗室分離的人外周血T淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法結合磁珠分選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養信息：

培養基：基礎培養基，含IL-2、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數的細胞能夠度過“危機"而繼續傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續傳代的培養細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養、種類多、價格便宜、無限傳代等優點，也非常容易在培養、凍存中發生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

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人外周血T淋巴細胞Clenbuterol Hydrochloride/BSA偶聯牛血清白蛋白BSA

F3 Protein Human 重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (His 標簽)

BACE1重組小鼠 BACE-1 蛋白 (His 標簽) Protein

CD38 Protein Mouse 重組小鼠 SCARB3 蛋白 (His 標簽)

LSAMP重組人 LSAMP 蛋白 (His 標簽) Protein

原代細胞培養的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。

7、計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8、培養：置于37℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。