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上海莼試生物技術有限公司
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ELISA試劑盒技術進行定量的平臺化方法
2019-9-25 閱讀(240)
ELISA試劑盒定量方法的類型和構架
來用 ELISA技術進行定量的平臺化方法——般來說可以分為兩類,即間接法和直接法。
間接法也稱為竟爭法,直接法也稱雙抗夾心法
今天,我們重點為大家介紹直接法。
直接法以定量抗原為例
首先,以與抗原有強親和力的抗體包被同定在酶標板材上,加入抗原標準品/樣品反應,再加入與抗原有強親和力的抗體并且偶
聯(lián)了辣根過氧化氫酶HRP/堿性磷酸酶AP的酶聯(lián)抗體反應,后加入酶對應的底物顯色,中間通過洗滌去除反應體系中未結
的試劑成分。
這樣信號大小和抗原的濃度成正相關,隨著反應的進行酶標板材上定的成分由抗體,轉(zhuǎn)變?yōu)榭贵w-抗原,后變?yōu)榭贵w-抗原-
酶聯(lián)抗體,待測的抗原處于兩個抗體之間,所以也稱為雙抗夾心法。
雙抗夾心法有一個關鍵點:待檢測的物質(zhì)(如抗原)必須給包被抗體和酶聯(lián)抗體提供兩個結合位點,這兩個位點可以是抗原上
兩個以上相同的結構位點,也可以是不同的結構位點。
一般來說, Elisae的構架由標進品,內(nèi)控品,空白對照,基質(zhì)對照和待測樣品組成。
內(nèi)控品
其中,內(nèi)控品是能夠使用的、獨立分裝的、特定濃度(高中低)的標準品,是監(jiān)控 ELISA實驗在單次實驗中的質(zhì)量和
的應用過程中不同批次標準品的過渡橋接。
空白對
空白對照為不含標準品的標準品溶液,基質(zhì)對照則為不含樣品的樣品溶液一一兩者可能是一樣的成分,也可能是不同的成分,
需要根據(jù)實驗的具體情況進行區(qū)分,目的是確認 ELISA體系中是否有非特異的交又反應
