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上海莼試生物技術有限公司
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番茄內(nèi)標準LAT52基因PCR試劑盒常見問題與解決方法
2022-7-5 閱讀(118)
番茄內(nèi)標準LAT52基因PCR試劑盒常見問題與解決方法:
陽性對照、待測樣本均無條帶。
1)、PCR反應體系或反應條件不合適。
2）、PCR試劑保存不當失去活性。
3）、引物設計問題。
解決方法：
1）使用梯度PCR摸索PCR反應條件。
2）2× PCR Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
3）嘗試重新設計引物進行檢查。
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。
1、不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。
2、加入組織裂解液過量。
3、樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。
4、模板加入量不適合。
5、PCR循環(huán)數(shù)不足。
解決方法：
1、使用新鮮的試劑。
2、增大反應體系，或減少裂解液的用量。
3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。
4、在反應體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應效性能較差時，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
5、適當增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因為模板復雜，一般PCR反應要比用純化的 DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。
