【產品名稱】

通用名稱：禽流感H7病毒IgG抗體定性檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza H7 Virus ELISA KIT

【包裝規格】

96人份/盒

【預期用途】

僅供科研使用，禽流感又名真性雞瘟或歐洲雞瘟，是由A型禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽類的一種急性、高度致死性傳染病，以急性敗血性死亡到無癥狀帶毒為特征。

本試劑用于檢測禽類血清中禽流感H7病毒抗體，可用于免疫效果評價、輔助診斷等。

【檢驗原理】

本試劑盒系由預包被禽流感H7病毒抗原的酶標板、抗體工作液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯免疫法原理檢測禽血清或血漿中禽流感H7病毒抗體。實驗時在酶標板中加入稀釋的待檢血清和抗體工作液，若樣品中含有禽流感H7病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽流感病毒抗體。

【主要組成成分】

主要成分

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為14天，其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。

【適用儀器】

  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。

【樣本要求】

  樣本類型和采集

1. 濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水20倍稀釋成工作洗滌液。
2. 血清/血漿：取動物全血按常規方法制備血清或血漿，要求血清/血漿清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

      蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。

3.用工作洗滌液將待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本按5倍稀釋（如10μl樣本加入40μl工作洗滌液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

樣本保存和穩定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品50μl。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，置37℃反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。

【檢驗結果的解釋】

1.PI=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100；

2.未曾免疫雞：PI≥50為陽性；PI＜50為陰性。

3.免疫雞群：監測并記錄樣本當時的抗體水平，根據結果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態的動向。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測禽流感H7病毒抗體，根據PI值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【保存條件】

    2℃-8℃保存，有效期6個月。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后*洗手。

技術提示

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變為藍色，代表底物溶液已經失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產物，會瞬間變為黃色。

6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序，每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關規定對待所有的廢物和污物。