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江蘇菲亞生物科技有限公司
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公司信息
細(xì)胞分離液快速操作說明
2019-1-17 閱讀(1042)
細(xì)胞分離液快速操作說明和使用及保存中的注意事項(xiàng)：
注意：1，分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時(shí)分離效果*。
2，使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
3，所有操作過程一定要在無菌條件下進(jìn)行。
4，*抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑
體積。
A. 小量分離-使用1-2ml新鮮抗凝血，骨髓，臍帶血：
1，取新鮮抗凝血1-2ml，與全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）1:1 混勻；
2，小心加于與混合液等體積的細(xì)胞分離液之液面上；
3，以400g（約1500 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）；
此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層。層;為血漿層。第二層；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層；為透明分離液層。第四層；為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含4-5ml 細(xì)胞洗滌液（Cat#：2010X1118）的試管中，充分混勻后，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘，棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細(xì)胞。
B. 中量分離-使用5-10ml新鮮抗凝血，骨髓，臍帶血：
1，取新鮮抗凝血5-10ml，與全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）1:1 混勻；
2，將混合液小心疊加于細(xì)胞分離液之液面上；（混合液：分離液=2：1）
3，以500g（約1800 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）；
此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層。層;為血漿層。第二層；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層；為透明分離液層。第四層；為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含10ml 細(xì)胞洗滌液（Cat#：2010X1118）的試管中，充分混勻后，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘，棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細(xì)胞。
C. 大量分離I-使用20ml新鮮抗凝血，骨髓，臍帶血：
1， 取新鮮抗凝血20ml 以200g（約1100 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘棄去血漿；
2，向棄去血漿的血細(xì)胞中加入全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）12ml 小心混勻；
3，將混合液小心疊加于細(xì)胞分離液之液面上；（混合液：分離液=2：1）
4，以600g（約2000 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）；此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層。層;為血漿層。第二層；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞
層。第三層；為透明分離液層。第四層；為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含20ml 細(xì)胞洗滌液（Cat#：2010X1118）的試管中，充分混勻后，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘，棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌2次即得所需細(xì)胞。
D. 大量分離II-使用50ml新鮮抗凝血，骨髓，臍帶血：
1， 取新鮮抗凝血50ml 與HES-TBD550 液1:1 混合后再與1 份注射用生理鹽水混勻20±2℃靜置30 分鐘。吸取混濁的上清液備用，棄去底部紅細(xì)胞。
2，將步驟1 中留取的上清液以200g（約1100 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘棄去上清保留沉淀細(xì)胞；
3，向沉淀的細(xì)胞中加入全血及組織勻漿稀釋液（Cat#：2010C1119）20ml 小心混勻；
4，將混合液小心疊加于細(xì)胞分離液之液面上；（混合液：分離液=2：1）
5，以600g（約2000 轉(zhuǎn)/分）離心15 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）；
此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為四層。層;為血漿層。第二層；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層；為透明分離液層。第四層；為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含20ml 細(xì)胞洗滌液（Cat#：2010X1118）的試管中，充分混勻后，以1800 轉(zhuǎn)/分離心20 分鐘，棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌2 次即得所需細(xì)胞。
