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新生牛血清的病毒檢查方法
2017-10-18 閱讀(949)
新生牛血清從出生14小時(shí)內(nèi)未進(jìn)食的新生牛采血分離血清，經(jīng)除菌過濾后制成。牛血清生產(chǎn)過程中不得任意添加其他物質(zhì)成分。
新生牛血清的病毒檢查
1. 細(xì)胞培養(yǎng)法
（1）非血吸附病毒檢查
將新生牛血清供試品分別接種到人源（如人二倍體細(xì)胞）、猴源（如Vero細(xì)胞）以及牛腎傳代細(xì)胞三種細(xì)胞，采用的牛腎傳代細(xì)胞系應(yīng)證明無牛病毒的污染。每種細(xì)胞至少接種6瓶，每瓶細(xì)胞懸液接種量不少于培養(yǎng)液總量的25%。于36±1℃培養(yǎng)21天。接種的每種細(xì)胞都應(yīng)同時(shí)設(shè)立牛血清陰性對(duì)照和病毒陽性對(duì)照，陰性對(duì)照用牛血清應(yīng)證明無牛病毒污染。
培養(yǎng)過程中可根據(jù)細(xì)胞生長情況更換細(xì)胞培養(yǎng)液，每次更換培養(yǎng)液前應(yīng)觀察（肉眼/顯微鏡）有無細(xì)胞病變出現(xiàn)。培養(yǎng)到期后，陰性對(duì)照應(yīng)無任何細(xì)胞病變出現(xiàn)，陽性對(duì)照應(yīng)出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變，試驗(yàn)成立。供試品檢查應(yīng)不出現(xiàn)任何細(xì)胞病變?yōu)殛幮裕弦蟆?nbsp;
（2）血吸附病毒檢查
將上述接種供試品的每種細(xì)胞取2瓶進(jìn)行血吸附病毒檢查。用0.2%~0.5%雞和豚鼠紅細(xì)胞混合懸液覆蓋于細(xì)胞表面，置2~8℃分鐘，然后置20~25℃30分鐘，分別進(jìn)行鏡檢，觀察紅細(xì)胞吸附情況， 供試品檢查結(jié)果均應(yīng)為陰性。試驗(yàn)同時(shí)應(yīng)設(shè)立血吸附陽性對(duì)照。
2. 免疫熒光抗體檢查法
采用直接或間接免疫熒光抗體檢查法，至少應(yīng)對(duì)牛腹瀉病毒，牛腺病毒、牛細(xì)小病毒、呼腸孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒進(jìn)行檢查，結(jié)果均應(yīng)為陰性。
