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江蘇菲亞生物科技有限公司
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丙二醛“MDA”指標(biāo)含量檢測操作方法
2017-3-9 閱讀(1412)
測試所需儀器設(shè)備：可見光分光光度計，可調(diào)到95℃左右的恒溫水浴箱（或者鋁鍋內(nèi)放幾個去掉蓋子的易拉罐，將罐壁及底部穿數(shù)十個孔，以便水的進(jìn)入，用來代替水浴箱）。離心機(jī)。
一、旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮薄膜扎緊，用針頭刺一小孔，95℃水浴（或用鍋開蓋煮沸40分鐘），取出后流水冷卻，然后3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液，532nm處，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度值。
二、以a表示所取的樣品量，標(biāo)準(zhǔn)品量，無水乙醇的量、試劑一的量，四者均相等，例如樣品取0.1mL，則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取0.1mL，若樣品取0.2mL，則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線，因而結(jié)果不受影響。
三、一般情況下，標(biāo)準(zhǔn)管、標(biāo)準(zhǔn)空白及測定空白管每批只需做1～2只，若測定管中蛋白量不是太高，則測定空白管可以不測，用標(biāo)準(zhǔn)空白管來代替測定空白管。
四、吸取上清比色時了好用移液器吸取上清加入比色皿中，盡量避免傾倒，以免沉淀進(jìn)入比色皿，影響吸光度。
注1.用此方法，所測各管吸光度值比規(guī)范操作方法要高，但不影響zui終結(jié)果。
注2.5％組織勻漿a*取0.1～0.2mL進(jìn)行檢測較好。
注3.若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光主葢低，可以將水浴時間40分鐘延長至80分鐘，但您的同一課題中MDA的檢測都必須延長至80分鐘，以免造成批間差異。
注4.此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度：當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為0.1mL時，則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度為0.103～0.112。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為0.2mL時，則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度為0.206～0.224。
