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江蘇菲亞生物科技有限公司
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培養細胞遺傳學的檢測技術
2017-3-9 閱讀(922)
細胞培養是體外研究細胞生物學性狀、遺傳學及分子生物學特性zui直接有效的手段。培養細胞遺傳學的主要檢測技術，包括性染色體的檢測、染色體顯示、染色體顯帶及染色體基因定位等。對培養細胞的分子生物學檢測主要包括細胞DNA檢測、RNA檢測及蛋白質的檢測，而相關的生物學檢測主要包括細胞酶學檢測及細胞凋亡的檢測。
組織培養細胞是研究細胞遺傳zui便利、zui有效的方法和對象；也是揭示培養細胞性狀的重要方面。人二倍體細胞具有46條染色體數就是用細胞培養法所確定出來的。當前已發展出染色體分帶、姊妹染色單體分化染色、染色體原位雜交等多種技術。近年染色體熒光基因標記法又獲得迅速發展，使基因作為實體得以在染色體上顯現，從而*染色體和分子遺傳學之間的空白。染色體的研究已成為組織培養技術中重要組成部分。
一、性染色體檢測
(一)原理
在間期細胞核中，女性x染色質和男性Y染色質均可用特殊染色法顯示出來。女性的兩個x染色體中的一個，在間期時的染色質呈異固縮(heteropycnosis)，呈深染的小體稱Barr氏體(圖9—1)。Barr氏體位于問期細胞核內面，呈三角形或半月形小體，易為碳酸復葒等染料著色。正常女性Barr氏體陽性，男性為陰性。男性Y染色質位于間期細胞核近中央部，易為鹽酸阿的平著色，熒光顯微鏡下觀察發較強熒光，呈點狀小體，發光部分系Y姿色體異固縮的長臂。初代培養細胞和二倍體細胞株均可觀察到性染色質，傳代細胞系表現不規律。
(二)方法
1.碳酸復紅(basic fuchsin)顯示x染色質法
(1)材料：蓋玻片培養的細胞。
(2)染色液
儲存液：稱堿性復紅3g，溶于1OOml 70％乙醇中，可長期保存。
工作液：(現用現配)
儲存液 10．0ml
5％石炭酸水溶液 90．0ml
冰醋酸 10．0 ml
甲醛(40％) 10．0ml
(3)染色步驟
1)細胞：蓋玻片培養細胞用37℃的BSS漂洗后，立即投入染色液內染色5～lOmin(亦可先固定再染色)；如用涂片標本則應待涂片干后，迅速投入96％酒精固定10～15min后再染色。
2)分化：用96％酒精分化lmin，分化時要不斷搖動，把片子上多余的染料漂洗掉。
3)脫水：通過純酒精lmin。
4)封片：二甲苯透明2~3min，樹膠封固。
(4)結果：細胞質不著色，細胞核染成紫紅色；陽性Barr氏體附于細胞核膜內面呈三角或半月形小體。
2．熒光染色顯不Y染色質法
(1)材料：蓋玻片培養的細胞。
(2)染色液
PBS(pH5．5～6．6) 100．0ml
鹽酸阿的平(atebrine) 0．2g
(3)染色步驟：Y染色質顯示染色與染色體熒光顯帶法相同。
(4)結果：在熒光顯微鏡下觀察，Y染色質呈特別明亮黃綠色熒光圓點，直徑0．25～ 0．3μm，可位于核內任何位置，但以近中央時居多。
