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如何檢測5hmc羥化酶TET的活性?參考Nature同款方案

閱讀:348發(fā)布時間:2021-4-1

很多研究表明,5hmC 表達(dá)水平與基因表達(dá)調(diào)控、多能干細(xì)胞分化、神經(jīng)元發(fā)育、以及腫瘤發(fā)生都密切相關(guān)。

 

人TET蛋白家族包含TET1TET2TET33個成員,所有TET蛋白都包含一個保守的雙鏈β-螺旋結(jié)構(gòu)域、一個富含半*區(qū)和C端的核心催化結(jié)構(gòu)域。而研究表明,基因組5hmC 水平與 TET 羥化酶活性相關(guān)。

 

那么如何檢測5hmc羥化酶TET的活性呢?不妨來看下Nature同款方案:

1.jpg

以5mC-羥化酶TET活性/抑制分析試劑盒【5mC-Hydroxylase TET Activity/Inhibition Assay Kit】為例分析說明,該試劑盒有比色法(#P-3086)和熒光法(#P-3087)兩種。

 

實(shí)驗(yàn)原理:甲基化底物被穩(wěn)定地包埋在微孔板上。活性 TETs (客戶提供)與底物結(jié)合,并將甲基化底物轉(zhuǎn)化為羥甲基化產(chǎn)物。Tet- 轉(zhuǎn)化的羥甲基化產(chǎn)物可以被特異性抗體識別。羥甲基化產(chǎn)物的比例或數(shù)量與酶的活性成正比,然后可以通過讀取波長為450nm的吸光度或者熒光強(qiáng)度來對比分析。TET 酶的活性與測得的光強(qiáng)度成正比。

 

適用樣本:TET酶的細(xì)胞核提取物;純化的TET酶(TETs, 1-3

 

性能展示:

2.jpg

 

好了,就介紹到這里啦,有興趣的小伙伴們評論區(qū)留言哈

 

文章來源:艾美捷科技


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