細胞:J82細胞
中文名稱:膀胱移行癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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成體細胞逆分化為干細胞只需改變四個基因
干細胞生物學研究中最大的一個問題就是克隆過程如何能讓成熟細胞恢復年幼,使它們回到胚胎細胞狀態(tài)。理想狀態(tài)就是找到一種方法將成年細胞之間轉化成胚胎干細胞,并且無需先創(chuàng)造出一個胚胎。(人U87 MG細胞 來源:通派細胞庫 人腦星形膠質母細胞)
使胚胎干細胞擁有它們的因子是否還能重新編排成年細胞,使其行為像胚胎干細胞。他們確定出在小鼠胚胎干細胞中表達的24個基因并利用病毒載體將這些基因的額外拷貝引入從小鼠尾巴頂部獲得的皮膚細胞中。(猴RF/6A細胞 來源:通派細胞庫 猴脈絡叢視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞)
當他們將24個基因的額外拷貝都插入細胞后發(fā)現(xiàn),吸收了這些基因的小部分細胞確實表現(xiàn)出了胚胎干細胞的特征。但是只引入一個基因不能引發(fā)這種轉變。(人MRC-5細胞 來源:通派細胞庫 人胚肺細胞)
通過排除法,研究組將候選基因刪減到了4個:當將它們同時引入小鼠尾巴細胞中時,能夠產(chǎn)生出類似胚胎干細胞的克隆。(貓CRFK細胞 來源:通派細胞庫 貓腎細胞)
這四個基因中的三個基因是之前已經(jīng)認識的,它們是Oct4、Sox2和從c-Myc。這些基因都是早期胚胎和胚胎干細胞中的關鍵基因。(人BXPC-3細胞 來源:通派細胞庫 人原位胰腺癌細胞)
這個基因是一種目前尚未知曉的在胚胎干細胞中起關鍵作用的轉錄因子。在此之前,還發(fā)現(xiàn)了干細胞自我更新關鍵因子Nanog;(大鼠BRL細胞 來源:通派細胞庫 大鼠肝細胞)
引入這四個基因的細胞似乎具備了從胚胎衍生的胚胎干細胞的所有關鍵特征。它們在培養(yǎng)皿中形成了幾種類型的組織并在給免疫缺陷小鼠注射后形成了腫瘤。