細胞:MLO-Y4細胞
中文名稱:鼠成骨細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
MLO-Y4細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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阿爾茨海默氏病患者神經元中的高爾基體為何會破碎
在阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD)中,淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)可以被α-,β-,γ-蛋白酶分解;(通派細胞庫供應:SNB-19細胞)其中β-蛋白酶和γ-蛋白酶的連續作用可使APP被分解產生β淀粉樣蛋白(Aβ)。
Aβ可以導致腦內老年斑的形成和神經細胞的凋亡,(通派細胞庫供應:KNS-89細胞)是導致阿爾茨海默病的重要因素。高爾基體結構,對于“將分子傳送到正確位置以形成一個功能性細胞”具有重要的作用。
高爾基體類似于細胞的“郵局”,當高爾基體破碎時,(通派細胞庫供應:B2-17細胞)它就像一個失控的“郵局”,將“包裹”發送到錯誤的位置,或根本就不發送它們。
在AD患者神經細胞中通常高度有序的高爾基體結構會發生這種碎裂。(通派細胞庫供應:HuT 78細胞)但是,引起這種缺陷的分子機制,以及對疾病發展的后作用,尚不明確。
研究中發現,β淀粉樣蛋白累積,可通過激活cdk5酶(使高爾基體結構磷酸化的蛋白例如GRASP65),(通派細胞庫供應:H9細胞)觸發高爾基體的碎裂。理解這一機制可有助于解碼阿爾茨海默氏病患者大腦中的淀粉樣斑塊形成,這些斑塊能夠殺死細胞、引起記憶喪失和其他老年癡呆癥的癥狀。
研究人員發現了高爾基體碎裂背后的分子過程,(通派細胞庫供應:H292細胞)并開發了兩種技術來“拯救”高爾基體結構:要么抑制cdk5,要么表達GRASP65的一個突變(其不能被cdk5修改)。這兩種救援措施能夠使有害β淀粉樣蛋白的分泌降低大約80%。