細胞:MEF細胞
中文名稱:小鼠胚胎成纖維細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
MEF細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
SUMO化修飾與細胞的生物鐘
盡管已經知道CLOCK是調控BMAL1磷酸化的,它同時還調控著BMAL1的SUMO化過程。但是BMAL1的SUMO化過程究竟有什么生物學功能?(通派細胞庫供應:PLC/PRF/5細胞)
與野生型BMAL1相比,突變的BMAL1(K259R)的量并不具有周期性的振蕩形式。另外,BMAL1(K259R)的量是野生型的兩倍,所以該蛋白的降解似乎有著非常重要的生物學功能。 (通派細胞庫供應:RKO細胞)
Bmal1-/-小鼠(Bmal1基因敲除)的胚胎成纖維細胞的E-box控制的基因的振蕩形式(Dbp)被改變了。BMAL1的病毒表達載體可以拯救該基因的周期性振蕩,(通派細胞庫供應:SW480細胞)但是如果是BMAL1(K259R),則產生了更短的Dbp節律性。
SUMO化在BMAL1的周期性表達和功能中具有重要作用,(通派細胞庫供應:SW598細胞)反映出了一個生物鐘調節的重要特征。今后的研究應該側重于識別SUMO通路中的各個元素,因為它們當中有些可能是選擇性為生物鐘調控服務的。