細(xì)胞:CBRH-7919細(xì)胞
中文名稱(chēng):大鼠肝癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
CBRH-7919細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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研究人員一直在尋找確定出這些microRNA開(kāi)關(guān)的方法,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):Eahy926細(xì)胞株)從而控制干細(xì)胞長(zhǎng)成新的血細(xì)胞的時(shí)間,為了確定出關(guān)鍵的microRNA,研究人員利用一種專(zhuān)門(mén)的計(jì)算機(jī)軟件篩選了數(shù)千個(gè)RNA片斷。
篩選結(jié)果顯示,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):VX2細(xì)胞株)一套由33種microRNA構(gòu)成的核心開(kāi)關(guān)能夠與超過(guò)1200種較大的不同的RNA相配對(duì),已經(jīng)知道這些較大的RNA對(duì)干細(xì)胞的成熟非常重要。
目前,研究人員正在利用一種非增殖病毒將33個(gè)microRNA的遺傳指令分別插入成體干細(xì)胞,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):QSG7701細(xì)胞株)從而檢測(cè)這些配對(duì)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)是否正確。
然后,他們將會(huì)在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)這些細(xì)胞。(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):Hep2細(xì)胞株)第一個(gè)進(jìn)行檢測(cè)的是microRNA-155已經(jīng)被證實(shí)能夠終止干細(xì)胞發(fā)育成紅血球和白血球。
和期望的一樣,沒(méi)有microRNA-155的干細(xì)胞成熟了,而攜帶microRNA-155的干細(xì)胞則很少能成熟為紅血球和白細(xì)胞。