細胞:AN3CA細胞
中文名稱:人子宮內膜腺癌(轉移)細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
AN3CA細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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復合體在通過NPC中央孔時所耗能量由RanGTPase水解GTP提供,(通派細胞庫供應:DT40細胞株)同時激活Importin β,后者可使Importin α和NLS分別從NLS-Importin α/β復合體上釋放下來,NLS分子在核內馬達分子(motor)推動下沿核內骨架發生固相傳輸(solid transfer)。
核內Importin β與RanGTP結合成二聚體再轉運回胞質,(通派細胞庫供應:A549細胞株 )胞質中Importin β/RanGTP二聚體在RanGTPase作用下解離為Importin β和RanGDP,Importin β繼續參與下一輪NLS蛋白的入核轉運;
核內Importin α的出核轉運過程較為復雜, (通派細胞庫供應:Raw264.7細胞株)首先核內Importin α在CAS蛋白和RanGTP作用下形成三聯體轉運回胞質,然后三聯體在胞質RanGTPase作用下解離為Importin α、CAS和RanGDP。
最后胞質Importin α繼續參與下一輪NLS蛋白的入核轉運過程,CAS則直接返回細胞核內。