細(xì)胞：A498細(xì)胞
中文名稱：人腎癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：MEM+15%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
A498細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；)
真核細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核是功能不同的兩個(gè)亞細(xì)胞部位，細(xì)胞核膜是二者分隔的重要屏障，(通派細(xì)胞庫供應(yīng)：b.End3細(xì)胞株)核膜上分布的核孔復(fù)合體(nuclear pore complex, NPC)是溝通細(xì)胞核內(nèi)外物質(zhì)交流和信息交流的主要通道。
生物大分子經(jīng)NPC跨核膜轉(zhuǎn)運(yùn)(nucleocytoplasmic transport )是真核細(xì)胞基因復(fù)制、(通派細(xì)胞庫供應(yīng)：Meth-A細(xì)胞株)轉(zhuǎn)錄和翻譯的必要環(huán)節(jié)，也是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)遞、參與細(xì)胞核反應(yīng)(即細(xì)胞增殖、分化、凋亡等核反應(yīng))調(diào)控的重要環(huán)節(jié)。
一般而言，分子量低于60kD的生物分子可自由通過NPC出入細(xì)胞核,(通派細(xì)胞庫供應(yīng)：Renca細(xì)胞株)而60kD以上的生物大分子通過NPC情形較為復(fù)雜，其核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)是一種耗能的需蛋白介導(dǎo)的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程，無論是入核(import)轉(zhuǎn)運(yùn)還是出核(export)轉(zhuǎn)運(yùn)均需耗能。
該過程由核膜Ran蛋白水解GTP為轉(zhuǎn)運(yùn)提供能量，(通派細(xì)胞庫供應(yīng)：Hek-293細(xì)胞株)因此核質(zhì)側(cè)核膜高RanGTP和胞質(zhì)側(cè)核膜高RanGDP濃度的不對(duì)稱性是核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的重要基礎(chǔ)。
需入核轉(zhuǎn)運(yùn)的生物大分子通常有參與基因復(fù)制、(通派細(xì)胞庫供應(yīng)：Hela細(xì)胞株)轉(zhuǎn)錄的蛋白因子和各種酶系，如復(fù)制酶、轉(zhuǎn)錄酶、U snRNP、hnRNP蛋白顆粒和細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子如Stat3等，以及其他需入核才發(fā)揮作用的外源性大分子如基因治療的外源重組DNA、病毒基因等；
相反，需出核轉(zhuǎn)運(yùn)的生物大分子包括細(xì)胞核內(nèi)各類RNA(rRNA、mRNA、tRNA)、(通派細(xì)胞庫供應(yīng)：Intestine 407細(xì)胞株)U snRNP蛋白顆粒、NES蛋白等。
生物大分子正常的出入核轉(zhuǎn)運(yùn)是真核細(xì)胞生長(zhǎng)、(通派細(xì)胞庫供應(yīng)：SBC-7細(xì)胞株)增殖、分化和發(fā)育等生命活動(dòng)的基本保證。
