細胞：RBMEC細胞

中文名稱：大鼠腦微血管內皮細胞

生長特性：貼壁

RBMEC細胞培養基：DMEM-L +10% FBS （GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養基，或自己配置的新鮮培養基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時）。

RBMEC細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。

4）：注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

鴨瘟病毒(DPV)核酸擴增檢測 

【實驗目的】用于檢測疑似動物(鴨、鵝等水禽)血清及組織(頭頸淋巴結等)病樣組織標本以及細胞培養液中鴨瘟病毒(DPV)DNA，適用于鴨瘟病毒(DPV)感染的輔助診斷及流行病學調查，其檢測結果僅供參考。

【實驗原理】用一對鴨瘟病毒(DPV)基因保守序列特異性引物和一條特異性熒光探針，經堿裂解法提取DNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過體外擴增法對鴨瘟病毒(DPV)進行擴增，從而達到快速定量檢測之目的。

【實驗組成】

（核酸提取液B 4管 500μl/管）（Taq 酶系  1管 80μl/管）（DPV-PCR MIX 1管 960μl/管）

（DPV陽性質控品 1管 50μl/管(1×107Copies/ml)）（陰性質控品 1管 500μl/管）

結果分析判定：

反應結束后保存檢測數據文件。根據分析后圖像調節baseline的start值（3~8），stop值（13~18）以及Threshold值，使Std curve 窗口下的標準曲線達到最佳（correlation數值介于-0.97~-1之間，correlation數值等同于∣r∣值），最后到Reporter窗口下記錄儀器自動分析計算出的未知標本數值（Qty-Copies/ml）。

【質控標準】

陰性質控品：全部陰性。

DPV-陽性質控品：陽性質控品的 Ct 值均應小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation數值介于-0.97~-1之間，correlation數值等同于∣r∣值）。

 以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效，全部試驗應重新進行。